| 人GPR81-Gi1α融合蛋白在杆状病毒系统中的表达及优化 |
| |
| 引用本文： | 吴芳明,韩春光,彭明丽,黄琳仪,王琼,朱欣凯,刘永学.人GPR81-Gi1α融合蛋白在杆状病毒系统中的表达及优化[J].生物技术通报,2008(Z1). |
| |
| 作者姓名： | 吴芳明 韩春光 彭明丽 黄琳仪 王琼 朱欣凯 刘永学 |
| |
| 作者单位： | 1. 军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京,100850;江西中医学院中药系,南昌,330004
2. 军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京,100850 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金(NO.30171096);;“十五”全军医药卫生基金(No.01MB056)资助项目 |
| |
| 摘 要： | 旨在建立获得融合蛋白GPR81-Gi1α的方法和最优条件。采用RT-PCR从人胚胎肾及大脑组织总RNA中分别扩增孤儿G蛋白偶联受体GPR81和Gi1α的完整表达序列(分别为1 041bp和1 065bp),并构建各自的重组质粒pcDNA3.1(+)-GPR81及pcDNA3.1(+)-Gi1α,再以重组质粒为模板,运用重叠延伸PCR法扩增得到融合基因GPR81-Gi1α,测序无误后将融合基因与pFASTBac1重组得重组质粒pFASTBac1-GPR81-Gi1α,而后转化DH10Bac,使该融合基因重组质粒发生特异性的转座和病毒重组,获得杆状病毒表达穿梭质粒pBacmid-GPR81- Ci1α,再将该重组杆粒转染昆虫sf9细胞,获得含杆状病毒的细胞分泌上清,以上清在不同条件下(包括不同感染时间、滴度等)感染sf9细胞以优化融合蛋白在昆虫sf9细胞的表达条件。结果表明,感染72h且感染强度moi为5时是融合蛋白在sf9细胞中高效表达的理想条件。该表达体系的建立及蛋白表达条件的优化,保证了足量GPR81- Gi1α融合蛋白的制备。
|
| 关 键 词： | GPR81 Gi1α 融合蛋白 bac-to-bac杆状病毒表达 |
Fusion of Human GPR81 with Gila and its Expression with Baculovirus System |
| |
| Wu Fangming,Han Chunguang,Peng Mingli,Huang Linyi,Wang Qiong,Zhu Xinkai,Liu Yongxue.Fusion of Human GPR81 with Gila and its Expression with Baculovirus System[J].Biotechnology Bulletin,2008(Z1). |
| |
| Authors: | Wu Fangming Han Chunguang Peng Mingli Huang Linyi Wang Qiong Zhu Xinkai Liu Yongxue |
| |
| Institution: | 1;2;1;2;1 Department of Pharmacology and Toxicology;Beijing Institute of Radiation Medicine;Beijing 100850;2 Department of Traditional Chinese Medicine;Jiangxi University of Traditional Chinese medicine;Nanchang 330004 |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | GPR81 |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
