| 荧光定量RT-PCR检测血管内皮细胞PAI-1 mRNA方法的建立 |
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| 引用本文： | 张文婷,张莲芬,周利苹,金坚.荧光定量RT-PCR检测血管内皮细胞PAI-1 mRNA方法的建立[J].生物技术通报,2008(6). |
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| 作者姓名： | 张文婷 张莲芬 周利苹 金坚 |
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| 作者单位： | 江南大学医药学院分子药理研究室,无锡,214122 |
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| 摘 要： | 为了建立用荧光定量PCR检测人微血管内皮细胞纤溶酶原激活剂抑制物-1（PAI-1）mRNA表达的方法。提取人微血管内皮细总RNA,经RT-PCR获得靶基因（PAI-1）及管家基因（β-actin）的PCR产物。纯化后,作为标准品梯度稀释,采用SYBR Green I定量PCR检测,建立标准曲线。方法学考核参数为特异性、线性范围、灵敏性和重复性。分析全反式维甲酸对内皮细胞表达PAI-1 mRNA的干预效果。这种定量方法特异性好,检测的灵敏度达10^3拷贝,线性范围为10^4-10^10拷贝,循环阈值与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系（r^2〉0.990）,批内变异≤4.93%,批间变异≤9.12%。全反式维甲酸能上调内皮细胞PAI-1 mRNA的表达,且呈剂量依赖性。因此,荧光定量RT-PCR检测血管内皮细胞PAI-1基因表达的方法有助于溶栓药物药理学的研究和新药筛选。
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| 关 键 词： | 荧光定量PCR 纤溶酶原激活剂抑制物-1 人微血管内皮细胞 全反式维甲酸 |
Establishment of the Method for Detecting PAI-1 mRNA Expression in Endothelia Cells by Using Fluorescence Quantitative RT-PCR |
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| Zhang Wenting,Zhang Lianfen,Zhou Liping,Jin Jian.Establishment of the Method for Detecting PAI-1 mRNA Expression in Endothelia Cells by Using Fluorescence Quantitative RT-PCR[J].Biotechnology Bulletin,2008(6). |
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| Authors: | Zhang Wenting Zhang Lianfen Zhou Liping Jin Jian |
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