| 山羊精子介导法转染外源基因影响因素及最适条件的研究 |
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| 引用本文： | 孙新明,邱效武,江嘉陵,魏泓.山羊精子介导法转染外源基因影响因素及最适条件的研究[J].生物技术通报,2009(Z1). |
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| 作者姓名： | 孙新明 邱效武 江嘉陵 魏泓 |
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| 作者单位： | 1. 井冈山大学,医学院,吉安,343000
2. 第三军医大学,基础部实验动物学教研室,重庆,400038 |
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| 摘 要： | 探讨山羊精子与外源DNA共孵育转染外源DNA效率的影响因素,优化精子转染程序.用DIG免疫组化方法检测和比较精子转染效率,因素为精子洗涤程度、转染缓冲液、精予活力、BSA、肝素、异种动物精浆等.离心洗涤3次以内的山羊精子DNase Ⅰ消化前、后阳性率随洗涤次数增加而显著增加(P＜0.05),而离心3次以上的转染效率略有下降;以mDM为共孵育缓冲体系可获得较高的转染效率;活力为0.55的精子转基因阳性率显著低于活力为0.9的精子(消化前、后阳性率分别为35.4±2.9%和21.8±5.3% vs 63.5±7.2%和50.3±2.8%,P＜0.os);共孵育体系中异种动物精浆可显著降低转染效率(P＜0.01),甚至与肝素可置换出已结合和内化转运到精子内的外源DNA,而共孵育体系中的BSA可抑制精子内化外源DNA.山羊共孵育法转染外源基因最适转染条件为mDM缓冲液洗涤3次后上浮收集高活力精子进行转染.
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| 关 键 词： | 精子介导基因转染 最适转染条件 山羊 |
Study on the Influencing Factors of Transfection Efficiency and the Optimum Conditions for Sperm-mediated Gene Transfer in Goats |
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| Sun Xinming,Qiu Xiaowu,Jiang Jialing,Wei Hong.Study on the Influencing Factors of Transfection Efficiency and the Optimum Conditions for Sperm-mediated Gene Transfer in Goats[J].Biotechnology Bulletin,2009(Z1). |
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| Authors: | Sun Xinming Qiu Xiaowu Jiang Jialing Wei Hong |
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