| 黑籽南瓜ISSR-PCR反应体系的正交设计优化 |
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| 引用本文： | 曹晖,杨正安,韩曙,蔡晓琳,张应华.黑籽南瓜ISSR-PCR反应体系的正交设计优化[J].生物技术通报,2008(Z1). |
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| 作者姓名： | 曹晖 杨正安 韩曙 蔡晓琳 张应华 |
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| 作者单位： | 云南农业大学园林园艺学院,昆明,650201 |
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| 基金项目： | 云南农业大学校青年基金项目(A2002002) |
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| 摘 要： | 以云南个旧黑籽南瓜叶片基因组DNA为模板,固定反应程序,采用L_(16)(4~5)正交试验设计的方法,对影响ISSR-PCR反应的五因素(dNTPs,Mg~(2+),引物,Taq DNA聚合酶,模板DNA)在四个水平上进行优化试验。研究建立起了适于云南黑籽南瓜ISSR-PCR的最佳反应体系:25μl反应体系中含10×buffer 2.5μl、0.15mmol/L dNTPs、2.5mmol/L Mg2+、0.40μmol/L引物、1.5U Taq DNA聚合酶、DNA模板15ng。扩增程序为:95℃预变性5min,94℃变性45s,52℃退火45s,72℃延伸90s,进行35个循环,最后72℃延伸7min。该优化体系的建立为今后用ISSR标记技术进行黑籽南瓜种质资源的分类鉴定和遗传多样性研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | 黑籽南瓜 ISSR 反应体系 正交设计 优化 |
Optimization for ISSR-PCR Reaction System of Cucurbita ficifolia Bouche by Orthogonal Design |
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| Cao Hui,Yang Zhengan,Han Shu,Cai Xiaolin,Zhang Yinghua.Optimization for ISSR-PCR Reaction System of Cucurbita ficifolia Bouche by Orthogonal Design[J].Biotechnology Bulletin,2008(Z1). |
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| Authors: | Cao Hui Yang Zhengan Han Shu Cai Xiaolin Zhang Yinghua |
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| Institution: | College of Horticulture and Landscape;Yunnan Agricultural University;Kunming 650201 |
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| Keywords: | ISSR |
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