漆酶Lac1338的酶学特性测定及定向突变对其酶解染料影响北大核心CSCD |
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引用本文: | 张雪玲陈小利李荷.漆酶Lac1338的酶学特性测定及定向突变对其酶解染料影响北大核心CSCD[J].生物技术通报,2016(7):170-177. |
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作者姓名: | 张雪玲陈小利李荷 |
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作者单位: | 1.广东药学院基础学院生物化学与分子生物学系510006; |
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基金项目: | 广东省科技厅项目(2012B010300021;2013B010404044);广东省教育厅项目(2013KJCX0107) |
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摘 要: | 为了获得表达量高、热稳定性好的漆酶,通过密码子优化合成漆酶基因lac1338、连接到pET-32a(+)载体上并在Escherichia coli BL21(DE3)中表达,获得HIS-Lac1338蛋白。酶学性质测定结果显示,以ABTS为底物时,HIS-Lac1338的比活力高达22.8 U/mg,Km和Vmax分别为567μmol/L和2.8 mmol/(L·min·g);HIS-Lac1338的最适反应温度为55℃,最适pH为6.0;在55℃以下保温2 h能保留50%的酶活性,在pH 4-8范围内孵育4 h仍保留50%以上的活性;HIS-Lac1338对Cu^(2+)抗性强,Ca^(2+)、Na^+、K^+对HIS-Lac1338有促进作用,而Co^(2+)、Fe^(2+)、Hg^(2+)、Ag^+等重金属离子对HIS-Lac1338有抑制作用。易错PCR方法得到的Lac1338的突变酶Lac16与HIS-Lac1338相比,对酸性紫7、溴酚蓝、考马斯亮蓝的降解率分别由10.9%、20%和25%提高到90.5%、67.8%和85%。结果表明,HIS-Lac1338具有较好的温度及pH稳定性,而通过易错PCR技术定向突变获得的突变酶Lac16的染料降解率大大提高。
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关 键 词: | 漆酶 克隆表达 酶学性质 定向进化 染料降解 |
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