薄荷GPPS基因原核表达及RNA干扰载体构建 |
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引用本文: | 于盱,梁呈元,刘艳,李维林.薄荷GPPS基因原核表达及RNA干扰载体构建[J].生物技术通报,2014(9). |
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作者姓名: | 于盱 梁呈元 刘艳 李维林 |
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作者单位: | 江苏省中国科学院植物研究所; |
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基金项目: | 江苏省自然科学基金项目(BK2010475);江苏省农业科技自主创新资金项目[CX(11)1021] |
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摘 要: | 利用薄荷挥发油合成途径关键酶之一的薄荷牻牛儿基焦磷酸合酶(GPPS)基因特异引物,扩增得到GPPS基因开放式阅读框(1 131 bp),并将其插入到原核表达载体pET-28a中,经酶切测序验证的重组质粒pET-28a-GPPS转入Rosetta(DE3),利用IPTG诱导表达融合蛋白。结果显示,终浓度为1 mmol/L的IPTG进行诱导后6 h,SDS-PAGE显示薄荷GPPS基因在Rosetta(DE3)中获得高效表达。目前利用RNA干扰技术研究基因功能的方法已日趋成熟,以GPPS大亚基基因为靶目标,成功构建了薄荷GPPS大亚基基因的pBI121-RNAi-GPPS干扰载体。
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关 键 词: | 薄荷 GPPS 原核表达 RNAi 载体构建 |
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