植物叶片基因组DNA快速提取方法 |
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引用本文: | 迟婧,耿丽丽,高继国,束长龙,张杰.植物叶片基因组DNA快速提取方法[J].生物技术通报,2014(9). |
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作者姓名: | 迟婧 耿丽丽 高继国 束长龙 张杰 |
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作者单位: | 东北农业大学生命科学学院;中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室; |
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基金项目: | 国家高技术研究发展计划“863项目”(2013AA102701);转基因重大专项(2011ZX08009-003-001) |
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摘 要: | 为了满足分子生物学研究中大量植株基因需要PCR检测的需求,建立了一种无需研磨、无需有机试剂抽提的快速提取植物叶片基因组DNA的方法。通过比较基因组DNA的浓度及PCR检测结果,获得了最佳提取条件,即约50 mg叶片加入150μL含1%β-巯基乙醇的TE提取液,快速破碎1 min。破碎后的样品4℃13 500×g离心1 min,上清于-20℃冷冻后室温融解,4℃、13 500×g离心1 min,离心后收集的上清溶液即可用于PCR检测。整个提取过程仅需10-12 min,具有样品用量小、操作简单、廉价、高效等优点。使用此方法提取的烟草、水稻、大豆、玉米、油菜和花生的基因组DNA均可用于PCR扩增,并可成功扩增长度为3 244 bp的基因片段。此方法提取的基因组DNA也可用于对未知基因的扩增,获得4条新的花生actin基因序列。
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关 键 词: | 基因组DNA 快速提取 细胞破碎法 PCR 扩增 |
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