| 寄生曲霉脂肪酶的全基因合成、原核表达及其结构分析 |
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| 引用本文： | 连英丽,蓝东明,杨博,王永华.寄生曲霉脂肪酶的全基因合成、原核表达及其结构分析[J].生物技术通报,2011(7). |
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| 作者姓名： | 连英丽 蓝东明 杨博 王永华 |
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| 作者单位： | 1. 华南理工大学生物科学与工程学院,广州,510006
2. 华南理工大学轻工与食品学院,广州,510641 |
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| 基金项目： | 广州市重点科技攻关项目 |
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| 摘 要： | 根据寄生曲霉脂肪酶基因序列(GenBank登录号:AF404488)及大肠杆菌密码子的偏爱性,应用重叠延伸PCR技术,人工合成了寄生曲霉脂肪酶基因lipAP.将基因克隆到pFL-B13cl载体上获得重组质粒pFL-B13cl/Lip AP,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行优化表达.融合蛋白Sumo-LipAP在0.1 mmol/L IPTG、37℃条件下诱导6 h表达量最高.SDS-PAGE分析显示融合蛋白His-Sumo-LipAP以包涵体形式表达,大小约为53 kD.复性后透析处理,大部分融合蛋白转化为正确构象且具有催化活性,经一步疏水层析其纯度可达98％.生物信息学工具预测和分析发现,LipAP空间结构保守,具有催化三联体(Ser173-Asp226-His288)、活性部位盖子(S111YSIRNWVTDAT122)及保守五肽(GHSLG)3个功能域.
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| 关 键 词： | 寄生曲霉脂肪酶基因 密码子优化 全基因合成 原核表达 生物信息学 |
Total Gene Synthesis, Prokaryotic Expression and Structure Analysis of Lipase from Aspergillus parasiticus |
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| Lian Yingli,Lan Dongming,Yang Bo,Wang Yonghua.Total Gene Synthesis, Prokaryotic Expression and Structure Analysis of Lipase from Aspergillus parasiticus[J].Biotechnology Bulletin,2011(7). |
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| Authors: | Lian Yingli Lan Dongming Yang Bo Wang Yonghua |
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