| S-亚胺还原酶和葡萄糖脱氢酶共表达系统的构建及手性胺的合成 |
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| 引用本文： | 李骥璇,余磊,李京美,郑桂兰,王洪钟.S-亚胺还原酶和葡萄糖脱氢酶共表达系统的构建及手性胺的合成[J].生物技术通报,2019(1):105-111. |
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| 作者姓名： | 李骥璇 余磊 李京美 郑桂兰 王洪钟 |
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| 作者单位： | 清华大学生命科学学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(21476124) |
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| 摘 要： | 旨在构建S-亚胺还原酶(S-IRED)和葡萄糖脱氢酶(GDH)在大肠杆菌中的一菌双酶共表达系统,实现辅酶NADPH的再生,高效合成手性仲胺。利用无缝克隆的手段设计构建一种单质粒双启动子共表达系统,以全细胞为催化剂催化手性仲胺S-2-甲基吡咯烷(S-2MP)的合成,并研究温度、pH及有机溶剂对双酶反应的影响。成功构建了S-IRED和GDH的重组共表达质粒,实现了S-IRED与GDH在大肠杆菌中的胞内共表达,以亚胺2-甲基吡咯啉(2MPN)为模式底物,以工程菌全细胞催化手性仲胺S-2MP的合成,在低辅酶添加时催化手性胺的产率和光学纯度均高于95%。该双酶共表达体系的最适温度和pH分别为37℃和pH 8,10%以下的甲醇对双酶反应有正向促进作用。大肠杆菌胞内双酶共表达系统的构建实现了辅酶NADPH的原位再生,降低了亚胺还原酶催化合成手性胺的成本,为手性胺的规模制备奠定了基础。
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| 关 键 词： | 亚胺还原酶 葡萄糖脱氢酶 共表达 手性胺 |
Construction of Co-expression System of S-imine Reductase and Glucose Dehydrogenase and Synthesis of Chiral Amine |
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| LI Ji-xuan,YU Lei,LI Jing-mei,ZHENG Gui-lan,WANG Hong-zhong.Construction of Co-expression System of S-imine Reductase and Glucose Dehydrogenase and Synthesis of Chiral Amine[J].Biotechnology Bulletin,2019(1):105-111. |
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| Authors: | LI Ji-xuan YU Lei LI Jing-mei ZHENG Gui-lan WANG Hong-zhong |
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| Institution: | (School of Life Sciences,Tsinghua University,Beijing 100084) |
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| Abstract: | LI Ji-xuan;YU Lei;LI Jing-mei;ZHENG Gui-lan;WANG Hong-zhong(School of Life Sciences,Tsinghua University,Beijing 100084) |
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| Keywords: | imine reductase glucose dehydrogenase co-expression chiral amine |
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