斑地锦查尔酮合酶基因及启动子的克隆与分析 |
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引用本文: | 郭三保,宋美玲,李灵心,尧子钊,桂明明,黄胜和.斑地锦查尔酮合酶基因及启动子的克隆与分析[J].生物技术通报,2023(4):148-156. |
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作者姓名: | 郭三保 宋美玲 李灵心 尧子钊 桂明明 黄胜和 |
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作者单位: | 1. 江西中医药高等专科学校药学系;2. 江西中医药高等专科学校医学基础部;3. 南昌大学抚州医学院 |
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基金项目: | 江西省教育厅科学技术研究重点项目(GJJ203301); |
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摘 要: | 黄酮类化合物槲皮素是斑地锦主要药效成分之一,而查尔酮合酶(CHS)是槲皮素生物合成过程中的关键酶。为阐明斑地锦中槲皮素生物合成机制,本研究以斑地锦为材料,根据转录组测序数据结合3’RACE、Tail-PCR技术,克隆了CHS基因及其启动子,将该基因命名为EmCHS(GenBank登录号为ON652865)。对EmCHS蛋白进行氨基酸序列比对、理化性质、跨膜结构域、亚细胞定位和系统进化树等分析,并采用实时荧光定量PCR技术检测EmCHS在不同生长期不同组织中的表达情况。结果显示,EmCHS开放阅读框(ORF)全长为1 194 bp,编码397个氨基酸,EmCHS蛋白定位于细胞质,理论等电点为5.96,相对分子质量为43.48 kD,不含跨膜区域,为结构稳定的亲水性蛋白。氨基酸序列比对和系统进化树分析结果显示,EmCHS与同为大戟科的木薯氨基酸序列相似性最高(91.92%),符合植物分类学的特点。RT-qPCR实验表明,EmCHS基因在斑地锦不同生长期不同组织中均有表达,且存在明显差异,在生殖生长期叶内表达水平最低,生殖生长期根内表达水平最高。克隆到的EmCHS启动子(GenBank登录号...
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关 键 词: | 斑地锦 CHS 启动子 克隆 热不对称交错PCR 生物信息学 基因表达 |
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