| 双抗体夹心ELISA定量检测IFNβ-HSA融合蛋白方法的建立 |
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| 引用本文： | 张立操,张莲芬,雷楗勇,陈其亮,陈蕴,许泓瑜,许正宏,张雁云,金坚.双抗体夹心ELISA定量检测IFNβ-HSA融合蛋白方法的建立[J].生物技术通报,2009(1). |
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| 作者姓名： | 张立操 张莲芬 雷楗勇 陈其亮 陈蕴 许泓瑜 许正宏 张雁云 金坚 |
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| 作者单位： | 江南大学医药学院分子药理研究室,无锡,214122 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)，上海市科学技术委员会生物医药重大科技攻关项目 |
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| 摘 要： | 为了建立β干扰素与人血清白蛋白融合蛋白(IFNβ-HSA)的酶联免疫定量分析方法,以抗IFNβ单克隆抗体为包被抗体,IFNβ-HSA融合蛋白为夹心抗原,辣根过氧化酶(HRP)标记抗HSA单克隆抗体为检测抗体,建立了一种定量测定IFNβ-HSA融合蛋白的双抗体夹心ELISA方法.并进行了检测限、精密度、准确度和稳定性等方法学考核.结果表明,包被抗体和检测抗体的最佳工作浓度均为2μg/ml,抗原浓度在51.88-3320 ng/ml范围内呈良好线性关系,相关系数R2>0.99.检测限为10ng/m1.经方法学考核,批内、批间变异系数分别为4.86%和8.08%,回收率为91.9%～110.4%,与IFN-B、IFN-α、HSA、IFNα2b-HSA基本无交叉反应.健全性分析表明发酵液稀释倍数对该方法无影响,8 d连续检测标准曲线表明稳定性良好.这种定量检测IFNβ-HSA融合蛋白的双抗体夹心ELISA方法,灵敏度高,重复性好,为当前融合蛋白发酵优化、分离纯化研究提供了定量检测的方法,并为后期药代动力学、临床研究提供了思路和备选方法.
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| 关 键 词： | 双抗体夹心 酶联免疫分析 β干扰素 人血清白蛋白 融合蛋白 定量分析 |
Development and Application of Double Antibodies Sandwich ELISA Method for Quantitative Detection of IFNβ-HAS |
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| Zhang Licao,Zhang Lianfen,Lei Jianyong,Chen Qiliang,Chen Yun,Xu Hongyu,Xu Zhenghong,Zhang Yanyun,Jin Jian.Development and Application of Double Antibodies Sandwich ELISA Method for Quantitative Detection of IFNβ-HAS[J].Biotechnology Bulletin,2009(1). |
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| Authors: | Zhang Licao Zhang Lianfen Lei Jianyong Chen Qiliang Chen Yun Xu Hongyu Xu Zhenghong Zhang Yanyun Jin Jian |
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