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H5亚型AIV NS1基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达
引用本文:詹爱军,王新卫,王宪文,覃健萍,毕英佐,于康震,曹永长.H5亚型AIV NS1基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达[J].生物技术通报,2008(2):191-195.
作者姓名:詹爱军  王新卫  王宪文  覃健萍  毕英佐  于康震  曹永长
作者单位:1. 华南农业大学动物科学学院,广州,510642;深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心,深圳,518042
2. 河南农业大学牧医工程学院,郑州,450002
3. 华南农业大学动物科学学院,广州,510642
4. 中国兽药监察所,北京,100081
摘    要:应用DNAStar软件,参照Genbank中注册的AIV H5亚型毒株NS1基因序列,设计了一对引物,用RTPCR方法成功地扩增出带双酶切位点的H5亚型AIV的NS1基因,通过BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切位点将H5NS1基因插入转移质粒裁体pFastbac HTa中,获得重组转移载体pFastbac HTa-H5NS1并将其转化DH10 Bac细胞,与Bacmid发生位点特异性转座作用,得到重组穿梭载体Bacmid-H5NS1,再将其转染昆虫细胞High Five,PCR鉴定证实该基因正确地插入到病毒基因组的多角体蛋白基因启动子下游,经过SDS-PAGE和Western Blot检测,NS1基因在High Five细胞中得到了表达,H5NS1大小约为28kD,而且表达的产物具有特异免疫学反应性.

关 键 词:禽流感病毒  非结构蛋白  杆状病毒表达  克隆  亚型  基因启动子  克隆  昆虫细胞  表达  Avian  Influenza  Virus  Gene  Protein  Cloning  Molecular  Insect  Cells  反应性  免疫学  大小  检测  Western  Blot  多角体蛋白  基因组  病毒
修稿时间:2007年11月7日

Molecular Cloning of Non-Structural Protein NS1 Gene of H5N1 Avian Influenza Virus(AIV)and its Expression in Insect Cells
Zhan Aijun,Wang Xinwei,Wang Xianwen,Qin Jianping,Bi Yingzuo,Yu Kangzhen,Cao Yongchang.Molecular Cloning of Non-Structural Protein NS1 Gene of H5N1 Avian Influenza Virus(AIV)and its Expression in Insect Cells[J].Biotechnology Bulletin,2008(2):191-195.
Authors:Zhan Aijun  Wang Xinwei  Wang Xianwen  Qin Jianping  Bi Yingzuo  Yu Kangzhen  Cao Yongchang
Abstract:
Keywords:
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