红罗非鱼Na~+-K~+-ATPase α基因的克隆及其在不同盐度条件下mRNA表达差异 |
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引用本文: | 王忠良,张健东,黄建盛,汤保贵,周晖,施钢,潘传豪,吴灶和,陈刚.红罗非鱼Na~+-K~+-ATPase α基因的克隆及其在不同盐度条件下mRNA表达差异[J].生物技术通报,2014(3). |
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作者姓名: | 王忠良 张健东 黄建盛 汤保贵 周晖 施钢 潘传豪 吴灶和 陈刚 |
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作者单位: | 广东海洋大学水产学院;广东省普通高校南海水产经济动物增养殖重点实验室;广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室;仲恺农业工程学院; |
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基金项目: | 广东省教育厅育苗项目(B12123);广东省科技厅专业镇中小微企业服务平台建设项目(2012B091400016) |
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摘 要: | 为获知红罗非鱼(Oreochromis sp.)Na+-K+-ATPaseα基因的全长分子结构及其在不同盐度条件下的表达情况,采用同源克隆及cDNA末端快速扩增(RACE-PCR)方法,首次在红罗非鱼鳃组织中克隆到了全长为3 379 bp的Na+-K+-ATPaseα基因全长cDNA序列,该序列包含3 072 bp的开放阅读框(ORF),143 bp的5'末端非编码区(UTR)和164 bp的3'末端非编码区(UTR),编码1023个氨基酸,预测分子量为112.5 kD,理论等电点为5.26。BLAST分析显示红罗非鱼Na+-K+-ATPaseα基因编码的氨基酸序列与其它已知物种相应基因编码的氨基酸序列的同源性达到97%-99%;系统进化分析显示,红罗非鱼Na+-K+-ATPaseα亚基与萨罗罗非鱼(Sarotherodon melanotheron)和莫桑比克罗非鱼(Oreochromis mossambicus)亲缘关系较近。应用Real-time PCR技术,以β-actin基因为内参,对不同盐度(0、15、25、32 g/L)条件下鳃组织中Na+-K+-ATPaseα基因的表达情况进行了比较分析,结果表明,当盐度为25 g/L时,Na+-K+-ATPaseα基因的表达量达到峰值,而盐度升至32 g/L时,其表达量呈下降趋势;各盐度处理组中,养殖12 h后Na+-K+-ATPaseα基因的mRNA表达量显著上升(P0.05)并达到最高;随着养殖时间的延长,24 h后该基因mRNA表达量开始降低,但仍然显著高于对照组的表达量值(P0.05)。
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关 键 词: | 红罗非鱼 Na+-K+-ATPase α基因 cDNA末端快速扩增 实时荧光定量PCR |
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