| 表达红色荧光及转胸腺素β4基因绵羊胎儿成纤维细胞系的制备 |
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| 引用本文： | 王彦凤,梁燕,王玮,史偈君,金永,王晓晶,郭旭东,王潇,王志钢,刘东军.表达红色荧光及转胸腺素β4基因绵羊胎儿成纤维细胞系的制备[J].生物技术通报,2010(12). |
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| 作者姓名： | 王彦凤 梁燕 王玮 史偈君 金永 王晓晶 郭旭东 王潇 王志钢 刘东军 |
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| 作者单位： | 内蒙古大学生命科学学院,哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室,呼和浩特,010021 |
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| 基金项目： | 转基因生物新品种培育重大专项课题研究计划(2008ZX08008-002) |
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| 摘 要： | 旨在构建胸腺素β4(thymosin beta4,Tβ4)基因真核表达载体并转染绵羊胎儿成纤维细胞,获得稳定表达胸腺素β4及红色荧光蛋白的转基因细胞克隆。将克隆载体pMD19TT中的胸腺素β4基因亚克隆到表达载体pIRES2-DsRed2的多克隆位点,构建表达载体pIRES2-DsRed2-Tβ4,脂质体介导转染绵羊胎儿成纤维细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。RT-PCR检测Tβ4基因在宿主细胞中的转录。测序结果显示,构建的表达载体pIRES2-DsRed2-Tβ4序列中,Tβ4基因正确连接在CMV启动子下游,顺序连接IRES2序列和红色荧光蛋白基因,载体构建正确。脂质体介导的稳定转染效率约为15%,经G418筛选得到转基因细胞克隆并高效表达红色荧光蛋白。RT-PCR检测显示外源Tβ4基因在绵羊胎儿成纤维细胞中得到转录。成功构建具有红色荧光蛋白和新霉素抗性双选择标记的胸腺素β4基因真核表达载体并稳定转染绵羊胎儿成纤维细胞,筛选得到的超表达胸腺素β4绵羊胎儿成纤维细胞系为下一步通过核移植和克隆技术获得转基因绵羊提供了条件。
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| 关 键 词： | 胸腺素β4 绵羊胎儿成纤维细胞 转基因细胞系 |
Construction of Transgenic Sheep Fetal Fibroblasts Cell Line Stably Expressing RFP and Thymosin Beta 4 |
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| Wang Yanfeng,Liang Yan,Wang Wei,Shi Jiejun,Jin Yong,Wang Xiaojing,Guo Xudong,Wang Xiao,Wang Zhigang,Liu Dongjun.Construction of Transgenic Sheep Fetal Fibroblasts Cell Line Stably Expressing RFP and Thymosin Beta 4[J].Biotechnology Bulletin,2010(12). |
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| Authors: | Wang Yanfeng Liang Yan Wang Wei Shi Jiejun Jin Yong Wang Xiaojing Guo Xudong Wang Xiao Wang Zhigang Liu Dongjun |
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| Institution: | Wang Yanfeng Liang Yan Wang Wei Shi Jiejun Jin Yong Wang Xiaojing Guo XudongWang Xiao Wang Zhigang Liu Dongjun(The Key Laboratory of Mammal Reproductive Biology and Biotechnology,Ministry of Education College of Life Science,Inner Mongolia University,Huhhot 010021) |
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