STK15转基因小鼠模型的建立

STK15基因是丝/苏氨酸激酶家族成员之一，其扩增和高表达能引起中心体复制扩增，染色体不稳定性增加，最终导致细胞的恶性转化，从而诱发恶性肿瘤。而且，STK15基因在多种恶性肿瘤组织中都具有高表达。目前，研究者们都是通过取人体不同部位的肿瘤组织来研究STK15基因与恶性肿瘤发生发展的关系，本次实验首次以建立STK15转基因小鼠模型，来进一步研究STK15基因与恶性肿瘤的关系，为今后的基因诊治提供理论基础。实验方法是首先提取人胚肺细胞总RNA作为模版，根据GenBank中STK15基因序列设计一对引物，用RT-PCR技术扩增出1200bp的STK15基因片段，克隆到pTZ57R/T载体，通过测序证实序列的正确性。用BamH1和XbaI双酶切载体pcDNA3.1和pTZ57R/T载体-STK15，然后回收、连接pcDNA3.1-STK15、转化、鉴定，从而成功构建了pcDNA3.1-STK15表达载体。然后对小鼠进行超排获得其原核期胚胎，应用显微注射法进行转基因操作，结果是注射成功率77%（701/907），移植鼠共30只，新生小鼠为106只，PCR检测转基因阳性为3只，经过Southern杂交检测有1只转基因阳性鼠，从而建立了转STK15的转基因小鼠模型。通过建立STK15肿瘤动物模型，找出与人类肿瘤相近的病理生理变化以及控制这些变化的遗传基础，为今后所有的恶性肿瘤的基因诊治提供坚实、有力的理论依据。