| 黑曲霉糖化酶cis调控区上两个CCAAT框协同参与基因启动子的转录激活作用 |
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| 引用本文： | 朱兴国,H.M.Wang,仇润祥,刘丽,董志扬,唐国敏.黑曲霉糖化酶cis调控区上两个CCAAT框协同参与基因启动子的转录激活作用[J].中国科学C辑,2003,33(6):495-504. |
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| 作者姓名： | 朱兴国 H.M.Wang 仇润祥 刘丽 董志扬 唐国敏 |
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| 作者单位： | 1. 中国科学院微生物研究所,北京,100080
2. Genencor International,Inc.925 Page Mill Road,Palo Alto,CA 94304,USA |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(批准号: 30170014) |
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| 摘 要： | 已报道的EMSA和Footprinting试验表明黑曲霉Aspergillus niger T21糖化酶基因glaA启动子区−489~−414 bp及−390~−345 bp (分别简称为DC, PC)是与蛋白粗提液中同一蛋白因子结合, 并均含有CCAAT五核苷酸的序列. 对DC, PC在糖化酶表达调控中的作用进行了分析. 用CGTAA取代CCAAT, 获得突变体DCm, PCm, 两者均丧失体外结合蛋白因子的能力. 突变体的体内分析结果显示, DC和PC中任何一个发生突变或改变DC, PC在原启动子中的相对方向, 则启动子的活性下降到基础表达水平. 将多拷贝串联后的DC引入A. niger T21glaA启动子原位, 则内源糖化酶的表达和由该启动子引导的外源uidA基因的表达均发生下降, 但由构巢曲霉3-磷酸甘油醛脱氢酶启动子PgpdA引导的uidA的表达不受影响, 而且EMSA结果表明不等DC拷贝的A. niger转化子中DNA结合蛋白的含量没有明显变化, 表明多拷贝DC的引入引起了调控蛋白的滴定效应. 从A. niger T21cDNA中克隆到AngHapC基因, 将AngHapC基因引入上述含多拷贝DC而糖化酶低表达的A. niger菌株, AngHapC基因的表达使糖化酶的表达量得到明显回升. 上述结果表明, DC和PC中CCAAT五核苷酸序列为蛋白因子结合所必需, 而且两者必须同时与调控蛋白结合才能发挥促进转录的作用, AngHapC为与DC区域结合的正调节蛋白.
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| 关 键 词： | 协同效应 突变分析 CCAAT多拷贝 滴定效应 黑曲霉糖化酶 |
| 收稿时间： | 2003-05-21 |
| 修稿时间： | 2003年5月21日 |
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