多枝赖草基因组可转化人工染色体(TAC)文库的构建和鉴定 |
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引用本文: | 徐粤宇,周玉雷,宋琳琳,张艳,赵茂林.多枝赖草基因组可转化人工染色体(TAC)文库的构建和鉴定[J].中国科学C辑,2008,38(4):328-336. |
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作者姓名: | 徐粤宇 周玉雷 宋琳琳 张艳 赵茂林 |
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作者单位: | 湖南工程学院化学化工系,仲恺农业技术学院生命科学学院,河南科技学院生物系,首都师范大学生命科学学院,北京市农林科学院生物技术研究中心 湘潭411104北京市农林科学院生物技术研究中心,北京100097,广州510225甘肃农业大学草业学院,兰州730070,新乡453003,北京100037,北京100097 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(批准号:30370905和30571135),北京市自然科学基金(批准号:5032009) |
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摘 要: | 为了克隆和转化多枝赖草(Leymus multicaulis)耐黄矮病、耐蚜虫、耐干旱、耐盐碱等抗逆性基因,利用脉冲电泳分离纯化2Mb以上核DNA,酶切后回收10~200kbDNA片段按大小分5组与TAC载体连接后电转化导入细菌DH10B,在卡那霉素和蔗糖选择压下均有阳性克隆.用两种TAC载体pYLTAC17和pYLTAC747H/sacB分别构建了文库I和II,约16.5和23.6万个克隆,估计覆盖3~5倍多枝赖草基因组大小.文库以混合克隆形式保存在12×2块深孔96孔板中,每孔1.2mL菌液中含300~600个克隆,40多万个克隆转存到3块384孔板,留24个孔存叶绿体和线粒体DNA探针菌液,可用于后续文库鉴定.此外,从文库I和II分别挑取2501和2890个单克隆存于14块384孔板中.17块384孔板都用GeneTAC^TMG3复制了2份,点高密度杂交膜6张,以多枝赖草谷胱甘肽还原酶基因5'RACE,GR和3'RACE+GR为探针初步筛选到19个阳性克隆,两文库为多枝赖草抗性基因的克隆、物理图谱的构建、功能验证等基因组有关研究奠定了基础。
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关 键 词: | 多枝赖草(Leymus multicaulis) Mb级DNA 可转化人工染色体(TAC) 基因组文库 |
收稿时间: | 2007-03-30 |
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