| 大肠杆菌tRNALeu的基因克隆、高效表达和纯化 |
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| 引用本文： | 李勇,王恩多,王应睐.大肠杆菌tRNALeu的基因克隆、高效表达和纯化[J].中国科学C辑,1998,28(3):193. |
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| 作者姓名： | 李勇 王恩多 王应睐 |
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| 作者单位： | 中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室 上海200031 |
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| 摘 要： | 用化学法合成的tRNALeu 和tRNALeu 2的基因分别连接到 pTrc99B质粒载体上 ,转化到大肠杆菌MT10 2中 .DNA测序筛选得到与已知tRNALeu1 和tRNALeu2 的基因顺序完全相同的克隆 .对带有tRNALeu1 和tRNALeu2 基因的 2个转化子 (MT -Leu1和MT- Leu2 )表达条件进行了优化 ,MT- Leu1和MT- Leu2总tRNA中的亮氨酸接受活力分别达到 810 pmol/A2 6 0 和 5 60 pmol/A2 6 0 :tRNALeu1 占MT -Leu1总tRNA的5 0 % ;tRNALeu2 占MT- Leu2总tRNA的 3 0 % .经DEAE Sepharose、BD -纤维素层析柱 ,可分别将MT- Leu1和MT -Leu2的总tRNA纯化到 160 0pmol/A2 6 0 .首次准确地测得了 2种等受体tRNALeu的氨酰化反应动力学常数 .
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| 关 键 词： | tRNALeu1 tRNALeu2克隆 高表达 纯化 |
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