人肺腺癌细胞分化相关基因cDNAs的克隆 |
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引用本文: | 黎伯铨,雷薇,王志华,张雪艳,蔡岩,王秀琴,吴旻,毛宝龄.人肺腺癌细胞分化相关基因cDNAs的克隆[J].中国科学C辑,1997,27(1):89. |
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作者姓名: | 黎伯铨 雷薇 王志华 张雪艳 蔡岩 王秀琴 吴旻 毛宝龄 |
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作者单位: | 中国医学科学院、中国协和医科大学肿瘤研究所 细胞生物室,分子肿瘤学国家重点实验室,北京100021 |
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摘 要: | 在用10-5 mol/L全反式维甲酸(RA)诱导人肺腺癌细胞系GLC-82分化的基础上,以M13噬菌粒pSPORT1为载体,应用定向克隆技术,分别构建了未经RA诱导和RA诱导1d及4d细胞的3个cDNA文库.以含重组子的诱导文库单链DNA为靶标(Target)同未诱导文库的cDNA驱除子(Driver)进行消减杂交,富集RA特异性单链DNA,将富集的单链DNA回复为双链后转化感受态菌,建立细胞诱导分化过程中活化表达基因的cDNA消减文库,得到124个cDNA消减克隆.经同源性分析和与文库总cDNA作Southern印迹杂交,进而与RA诱导前后细胞的RNA作Northern印迹杂交,筛选出2个(RA5,RA28)诱导后呈早期瞬时表达和1个(RA42)呈早期并持续表达的cDNA克隆,cDNA全长分别为1.8,1.5和0.7kb.序列测定及初步功能分析结果表明,RA5,RA28和RA42这3个首次报道的序列,可能是人肺腺癌细胞分化相关基因的cDNA克隆.
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关 键 词: | 分化相关基因 消减杂交 cDNA克隆 维甲酸 肺腺癌 |
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