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人肺腺癌细胞分化相关基因cDNAs的克隆
引用本文:黎伯铨,雷薇,王志华,张雪艳,蔡岩,王秀琴,吴旻,毛宝龄.人肺腺癌细胞分化相关基因cDNAs的克隆[J].中国科学C辑,1997,27(1):89.
作者姓名:黎伯铨  雷薇  王志华  张雪艳  蔡岩  王秀琴  吴旻  毛宝龄
作者单位:中国医学科学院、中国协和医科大学肿瘤研究所 细胞生物室,分子肿瘤学国家重点实验室,北京100021
摘    要:在用10-5 mol/L全反式维甲酸(RA)诱导人肺腺癌细胞系GLC-82分化的基础上,以M13噬菌粒pSPORT1为载体,应用定向克隆技术,分别构建了未经RA诱导和RA诱导1d及4d细胞的3个cDNA文库.以含重组子的诱导文库单链DNA为靶标(Target)同未诱导文库的cDNA驱除子(Driver)进行消减杂交,富集RA特异性单链DNA,将富集的单链DNA回复为双链后转化感受态菌,建立细胞诱导分化过程中活化表达基因的cDNA消减文库,得到124个cDNA消减克隆.经同源性分析和与文库总cDNA作Southern印迹杂交,进而与RA诱导前后细胞的RNA作Northern印迹杂交,筛选出2个(RA5,RA28)诱导后呈早期瞬时表达和1个(RA42)呈早期并持续表达的cDNA克隆,cDNA全长分别为1.8,1.5和0.7kb.序列测定及初步功能分析结果表明,RA5,RA28和RA42这3个首次报道的序列,可能是人肺腺癌细胞分化相关基因的cDNA克隆.

关 键 词:分化相关基因  消减杂交  cDNA克隆  维甲酸  肺腺癌
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