| 高效表达具有生物学活性的植酸酶的毕赤酵母 |
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| 引用本文： | 姚斌,张春义,王建华,范云六.高效表达具有生物学活性的植酸酶的毕赤酵母[J].中国科学C辑,1998,28(3):237. |
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| 作者姓名： | 姚斌 张春义 王建华 范云六 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业科学院饲料研究所 北京100081;
2.中国农业科学院生物技术中心,北京100081 |
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| 摘 要： | 对来源于Aspergillusniger 96 3的植酸酶基因 phyA2进行了改造 ,包括去掉基因中的内含子和信号肽编码序列 ,在不改变所编码氨基酸的情况下 ,定点突变优化了对此基因在酵母中高效表达起关键作用的Arg密码子 .经改造的植酸酶基因按正确的阅读框架融合到毕赤酵母 (Pichiapastoris)高效表达载体 pPIC9上的α 因子信号肽编码序列 3′端 ,重组表达载体电击转化毕赤酵母得到重组转化子 ,经Southernblotting分析证实了植酸酶基因已整合到酵母基因组中 ,并确定了基因整合的拷贝数 .Northernblotting分析证明植酸酶基因能进行正常的转录 .SDS PAGE分析和表达产物的酶活性研究证明 ,植酸酶能有效分泌和高效表达 (Arg密码子优化后其表达量可达每毫升培养液 1 5 0 0 0U ,比Arg密码子没有优化的表达量高约 37倍 ,比原菌株A .niger 96 3的表达量高约 30 0 0倍 ) ,表达产物具有正常的生物学活性 .这是迄今为止我国饲料工业中 ,构建的第 1株具有实用价值和应用前景的生产饲料添加剂的基因工程菌株
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| 关 键 词： | 植酸酶基因phyA2 重组毕赤酵母 高效表达 |
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