| 通过同源重组构建酿酒酵母新型表达质粒 |
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| 引用本文： | 陈向岭,袁汉英,何炜,胡翔华,吕红,李育阳.通过同源重组构建酿酒酵母新型表达质粒[J].中国科学C辑,2005,35(1):37-43. |
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| 作者姓名： | 陈向岭 袁汉英 何炜 胡翔华 吕红 李育阳 |
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| 作者单位： | 复旦大学生命科学学院,遗传工程国家重点实验室,上海,200433 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划资助项目(批准号:863—102-11-02-02) |
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| 摘 要： | 利用同源重组的方法, 构建了具有高拷贝数和高稳定性的新型酿酒酵母表达质粒. 对酵母附加体型载体pHC11进行一系列改造, 得到质粒pHC11R, 并用适当的酶切线性化; 利用PCR反应得到人IFNα2b表达单元片段, 它的两端和线性化的pHC11R的两端具有50 bp左右的同源区段. 上述两个片段共转化酿酒酵母, 在酵母体内经同源重组后得到表达质粒pHC11R-IFNα2b, 该表达质粒与 pHC11-IFNα2b相比去除了质粒上用于在大肠杆菌中复制和筛选所需的序列, 在宿主菌中的稳定性和拷贝数均有明显提高, 同时外源基因的表达量也获得了一定程度的提高. 在此基础上, 进一步构建了带有不同表达元件的pHR系列载体, 使得外源基因能够通过同源重组在酿酒酵母中快速、方便地克隆和表达.
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| 关 键 词： | 酿酒酵母 表达质粒 同源重组 |
| 收稿时间： | 2004-03-15 |
| 修稿时间： | 2004年3月15日 |
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