| Split内含肽高效介导转录激活因子的胞内融合 |
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| 引用本文： | ① 中国科学院北京基因组研究所新药研发组,北京,
② 中国科学院植物研究所,北京,.Split内含肽高效介导转录激活因子的胞内融合[J].中国科学C辑,2008,38(8):714-721. |
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| 作者姓名： | ① 中国科学院北京基因组研究所新药研发组 北京
② 中国科学院植物研究所 北京 |
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| 作者单位： | 中国科学院北京基因组研究所新药研发组 北京100029(高元吉，赵传科，尹琪，王慧，曾新，王少鹏，栗世铀)，中国科学院植物研究所 北京100093(于文文) |
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| 基金项目： | 致谢 感谢新英格兰实验室的Ming-Qun Xu博士提供pKEB1和pMEB4质粒和Lori Tonello给予的帮助. |
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| 摘 要： | Sprit内含肽可以通过反式剪接作用介导两个蛋白片段的共价连接．基于这一原理，利用来自于Synechocystis sp．strain PCC6803的天然sprit内含肽DnaEs作为蛋白剪接元件，通过其反式剪接作用介导了四环素阻遏蛋白（TetR）与1-型单纯疱疹病毒（HSV）的转录活化域（VP16）的共价连接，形成融合蛋白TV．应用RT-PCR技术以及荧光显微镜成像技术分别在mRNA转录水平与蛋白表达水平上研究了DnaEs的剪接活性，结果证明在细胞内DnaEs可以介导融合蛋白TV的产生．同时也对融合蛋白TV的转录活性进行了研究，并将其与通过重组DNA表达得到的同种蛋白的转录活性进行了比较，发现DnaEs介导的融合蛋白与基因重组得到的同种蛋白转录活性相似．此外，还研究了四环素类似物Dox对TV转录活性的调控，结果表明Dox可以明显抑制其转录活性．DnaEs介导转录激活因子融合，并启动下游报告基因表达的实验方法，为深入开展DnaEs的应用研究提供了重要实验依据．
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| 关 键 词： | DnaEs 蛋白剪接 四环素阻遏蛋白 1-型单纯疱疹病毒 转录活化域 转录激活因子 |
| 收稿时间： | 2008-03-06 |
| 修稿时间： | 2008-06-16 |
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