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口蹄疫病毒A/AKT/58株基因组全长感染性cDNA克隆的体内拯救
引用本文:
白兴文,李平花,曹轶梅,李冬,卢曾军,郭建宏,孙德惠,郑海学,孙普,刘湘涛,罗建勋,刘在新.口蹄疫病毒A/AKT/58株基因组全长感染性cDNA克隆的体内拯救[J].中国科学C辑,2008,38(11):1028-1035.
作者姓名:
白兴文
李平花
曹轶梅
李冬
卢曾军
郭建宏
孙德惠
郑海学
孙普
刘湘涛
罗建勋
刘在新
作者单位:
中国农业科学院兰州兽医研究所,农业部畜禽病毒学重点开放实验室,国家口蹄疫参考实验室,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,广东省农业科学院
基金项目:
国家重点基础研究发展计划(批准号: 2005CB23201)和国家科技支撑计划(批准号: 2006BAD06A03)资助项目
摘 要:
构建了两种口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)基因组全长cDNA克隆DTA/FMDV和pCA/FMDV,利用体外转录和体内转录方法制备感染性病毒,并对其抗原性,乳鼠毒力(LD50)和病毒生长动力学等生物学特性进行了分析。为了鉴别野毒与重组病毒,利用融合PCR技术在两种全长cDNA基因组内分别引入了几个点突变(pTA/FMDV;T1029G,pCA/FMDV:A174G,A308G,T1029G)作为遗传标记。结果表明,两种重组病毒对3日龄乳鼠均表现致病性。但是由pTA/FMDV合成的感染性体外转录本RNA的毒力较弱(10^-6);而与pCT7RNAP质粒共转染的pCA/FMDV体内拯救病毒的毒力较强(10^-7.5),并在BHK-21细胞上表现出与野毒相似的生长特性。这一结果表明,在FMDV的拯救过程中,以pCT7RNAP为基础的体内拯救系统相比体外转录方法更为简便、实用。该系统为利用反向遗传操作技术深入研究FMDV的分子致病机制及其准种特性等奠定了良好的基础。
关 键 词:
口蹄疫病毒
感染性cDNA克隆
体内转录
A/AKT/58株
收稿时间:
2008-02-25
修稿时间:
2008-06-16
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