| 利用体细胞核移植技术生产表达绿色荧光蛋白的猪转基因克隆胚胎 |
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| 引用本文： | 张运海,潘登科,孙秀柱,孙国杰,王晓波,刘晓辉,李燕,戴蕴平,李宁.利用体细胞核移植技术生产表达绿色荧光蛋白的猪转基因克隆胚胎[J].中国科学C辑,2005,35(5):439-445. |
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| 作者姓名： | 张运海 潘登科 孙秀柱 孙国杰 王晓波 刘晓辉 李燕 戴蕴平 李宁 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业大学,农业生物技术国家重点实验室,北京,100094
2. 中国农业大学,农业生物技术国家重点实验室;中国农业大学,动物科技学院,北京,100094 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973计划)，北京市自然科学基金 |
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| 摘 要： | 以转染了质粒pEGFP-N1的猪胎儿成纤维细胞与体外成熟(in vitro maturation, IVM)的猪卵母细胞构建克隆胚, 比较了细胞转染后G418筛选与否, 卵母细胞IVM持续时间及IVM时氧分压高低对克隆胚早期发育的影响. 结果如下: (ⅰ) G418连续筛选10天所得转GFP细胞的克隆胚卵裂率显著低于非筛选组(47.5% vs. 71.6%, P<0.05), 而囊胚率差异不显著(10% vs. 10.4%, P>0.05); (ⅱ) 相比于36 h IVM, 延长IVM时间至 42 h卵母细胞的核成熟明显改善(83.6% vs. 96.7%, P<0.05); 另外, 虽然IVM 42 h也使得克隆胚卵裂率(59.3% vs. 73.6%)及囊胚率(9. 3% vs. 13.2%)都略有提高, 但效果不显著 (P>0.05); (ⅲ) 7%氧IVM 42 h 的卵母细胞与20%氧处理组相比, 克隆胚的卵裂率(70.6% vs. 67.1%)以及囊胚率(11.8% vs. 12.3%)差异都不明显(P>0.05). 上述结果显示: (ⅰ) G418筛选对转绿色荧光蛋白基因(GFP)克隆胚卵裂不利; (ⅱ) IVM 36和42 h的卵母细胞对克隆胚早期发育影响不明显, 但IVM 42 h有利于核成熟, 因此构建克隆胚时仍以IVM 42 h的卵母细胞为宜; (ⅲ) 低氧对猪转GFP克隆胚早期发育无明显促进作用.
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| 关 键 词： | 绿色荧光蛋白 猪 早期发育 转基因克隆 |
| 收稿时间： | 2005-03-07 |
| 修稿时间： | 2005年3月7日 |
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