| 金针菇G蛋白偶联受体基因的CRISPR/Cas9基因组编辑载体构建及转化研究 |
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| 引用本文： | 林金德,杨雪琴,魏韬,郭丽琼,林俊芳,陈韵声,黄诗诗.金针菇G蛋白偶联受体基因的CRISPR/Cas9基因组编辑载体构建及转化研究[J].菌物学报,2019,38(3):349-361. |
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| 作者姓名： | 林金德 杨雪琴 魏韬 郭丽琼 林俊芳 陈韵声 黄诗诗 |
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| 作者单位： | 华南农业大学食品学院生物工程系 广东广州510642;广东省微生态制剂工程技术研究中心 广东广州510642;华南农业大学食品学院生物工程系 广东广州510642 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31372116);国家自然科学基金(31572178);广东省现代农业食用菌产业体系岗位专家(2018LM1125);广东省现代农业食用菌产业体系岗位专家(2018LM1126) |
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| 摘 要： | 通过氨基酸同源比对（Blast P）以及金针菇冷诱导前后菌丝阶段和原基阶段的转录组数据分析,获得了金针菇中的两个假定G蛋白偶联受体基因Fvgpcr1、Fvgpcr2。对获得的金针菇假定G蛋白偶联受体基因Fvgpcr1、Fvgpcr2构建了基因组编辑（CRISPR/Cas9）的pCAMBIA0390-hph-Fvcas9-Fvgpcr1- sgRNA1/sgRNA2、pCAMBIA0390-hph-Fvcas9-Fvgpcr2-sgRNA1/sgRNA2等4个表达载体。通过农杆菌介导（ATMT）将表达载体pCAMBIA0390-hph-Fvcas9-Fvgpcr-sgRNA转化金针菇菌丝体,采用潮霉素和头孢毒素低浓度初筛和高浓度复筛,经两段筛选获得金针菇拟转化子。经对拟转化子进行PCR鉴定、RT-qPCR检测和Western杂交验证,结果显示表达载体pCAMBIA0390-hph-Fvcas9-Fvgpcr-sgRNA成功整合进金针菇基因组中,FvCas9蛋白正常表达,但未得到Fvgpcr基因敲除突变体。本研究利用农杆菌介导转化法在金针菇中构建了CRISPR/Cas9敲除体系,对后续目标基因的敲除有着重要意义。
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| 关 键 词： | 金针菇 CRISPR/Cas9 G蛋白偶联受体 农杆菌介导转化 |
| 收稿时间： | 2018-10-25 |
Construction and transformation of CRISPR/Cas9 genome editing vector of Flammulina filiformis G protein-coupled receptor gene |
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| Authors: | LIN Jin-De YANG Xue-Qin WEI Tao GUO Li-Qiong LIN Jun-Fang CHEN Yun-Sheng HUANG Shi-Shi |
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| Institution: | ①College of Food Science, South China Agricultural University, Guangzhou, Guangdong 510642, China②Research Center for Microecological Agents of Guangdong Province, Guangzhou, Guangdong 510642, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Flammulina filiformis CRISPR/Cas9 G-protein coupled receptor Agrobacterium-mediated transformation |
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