| 拟南芥abi5基因的分子克隆及其在原核细胞中的表达和纯化 |
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| 引用本文： | 马燕林,马建忠,王永刚.拟南芥abi5基因的分子克隆及其在原核细胞中的表达和纯化[J].植物生理学通讯,2014(2):185-191. |
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| 作者姓名： | 马燕林 马建忠 王永刚 |
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| 作者单位： | 兰州理工大学生命科学与工程学院,兰州730050 |
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| 基金项目： | 资助国家基金委地区科学基金（31060041）和甘肃省自然科学基金B类（1212RJYA008）. |
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| 摘 要： | 拟南芥abi5基因编码了一个碱性亮氨酸拉链类转录因子,它在ABA信号转导过程中发挥着关键调控作用。本文以拟南芥为材料,通过RT-PCR扩增、克隆了包含abi5基因编码区的片段。核苷酸序列分析表明,所克隆的基因与NCBI数据库收录的abi5基因（GenBank登录号NM129185.3）有99.0%的一致性;氨基酸序列存在4个残基差异。所克隆的abi5基因被进一步亚克隆至pET-32a表达载体。序列测定核实构建正确的重组质粒（pET32a-ABI5）转化入大肠杆菌BL21 Star（DE3）中诱导表达。表达产物经Ni-NTA亲和层析柱分离纯化、SDS-PAGE分析和质谱鉴定。结果表明,重组abi5基因在大肠杆菌表达的较适宜条件为：异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）终浓度为0.3 mmol L-1、30℃下诱导4 h,可达到细菌裂解液上清蛋白的29.1%。经Ni-NTA亲和层析柱纯化后的ABI5融合蛋白在SDS-PAGE电泳分析时呈现一条蛋白带。该条带经串联质谱分析证明为重组ABI5融合蛋白。
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| 关 键 词： | 拟南芥 abi5 分子克隆 原核表达 纯化 质谱 |
Molecular Cloning,Prokaryotic Expression and Purification of abi5 Gene from Arabidopsis thaliana L. |
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| MA Yan-Lin,MA Jian-Zhong,WANG Yong-Gang.Molecular Cloning,Prokaryotic Expression and Purification of abi5 Gene from Arabidopsis thaliana L.[J].Plant Physiology Communications,2014(2):185-191. |
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| Authors: | MA Yan-Lin MA Jian-Zhong WANG Yong-Gang |
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| Institution: | School of Life Science and Engineering, Lanzhou University of Technology, Lanzhou 730050, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Arabidopsis thaliana abi5 molecular cloning prokaryotic expression purification mass |
| 本文献已被 维普 等数据库收录！ |
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