定向进化技术改良β-糖苷酶的低聚糖合成性能 |
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引用本文: | 冯惠勇,仪宏,王丽丽.定向进化技术改良β-糖苷酶的低聚糖合成性能[J].生物加工过程,2006,4(1):44-49. |
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作者姓名: | 冯惠勇 仪宏 王丽丽 |
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作者单位: | 河北科技大学,生物科学与工程学院,石家庄,050018 |
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摘 要: | 对携带糖苷酶基因pBBGly的质粒pBtac2进行易错PCR定向进行研究,以改良其合成低聚糖催化性能。来源于Thermus thermophilus的耐高温β-糖苷酶,通过一轮易错PCR随机突变和限制性酶切再连接介导的体外基因重组,获得了两株高转糖基活性的突变酶:N339TF401S和F401S。它们能以天然糖类为糖基受体,低聚糖的合成得率分别为48%和62%,是野生型酶的6~8倍,而底物的水解活力只有野生型酶的0.08%和1.3%。另外,在突变酶的酶反应中,糖基受体对供体的水解反应有显著的促进作用,而野生型酶没有此特征。并且它们的催化水解动力学特征也明显区别于野生酶,水解反应初始浓度对速度关系呈一条直线。
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关 键 词: | 定向进化 β-糖苷酶 低聚糖 转糖基反应 水解反应 |
文章编号: | 1672-3678(2006)01-0044-06 |
收稿时间: | 2006-01-04 |
修稿时间: | 2006年1月4日 |
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