| 间接ELISA法在注射用矛头蝮蛇血凝酶蛇毒种属鉴别中的应用 |
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| 引用本文： | 李秀娜,孙东,李秀琳,崔亮亮,丁忠福,宁静.间接ELISA法在注射用矛头蝮蛇血凝酶蛇毒种属鉴别中的应用[J].蛇志,2016(2):117-120. |
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| 作者姓名： | 李秀娜 孙东 李秀琳 崔亮亮 丁忠福 宁静 |
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| 作者单位： | 辽宁远大诺康生物制药有限公司,辽宁沈阳,110171 |
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| 摘 要： | 目的建立间接ELISA法定性检测矛头蝮蛇血凝酶,用于巴曲亭蛇毒种属来源检测。方法将矛头蝮蛇血凝酶为抗原免疫小鼠,与尖吻蝮蛇血凝酶、白眉蝮蛇血凝酶交叉筛选获得特异性单克隆抗体。优化矛头蝮蛇血凝酶单抗(一抗)、HRP标记的羊抗鼠(二抗)IgG、矛头蝮蛇血凝酶(抗原)工作浓度,建立间接ELISA检测方法。考察方法的重复性、中间精密度,确定方法的适用性。采用膜超滤法将巴曲亭中辅料去除,按照建立的ELISA法检测,判定种属来源。结果矛头蝮蛇血凝酶单抗具有强特异性,一抗的最佳工作浓度1∶4000(250ng),二抗的最佳工作浓度1∶4000(250ng),抗原浓度2μg/孔,该法重复性和中间精密度较好。巴曲亭与矛头蝮蛇血凝酶单抗有特异性反应,与其它蛇毒来源血凝酶单抗无交叉反应,确定巴曲亭来源于矛头蝮蛇蛇毒。结论本研究建立的ELISA法具有较好的特异性,可作为巴曲亭蛇毒种属来源判断的方法。
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| 关 键 词： | 矛头蝮蛇血凝酶 巴曲亭 酶联免疫吸附法 种属特异性 |
The application of indirect ELISA on snake venom species identification in Hemocoagulase Bothrops atrox for Injection |
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