| 三种组成型启动子调控的鼠李糖脂基因在防御假单胞菌中的异源表达及活性研究 |
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| 引用本文： | 谢芝玲,陈汉娜,钟林,徐佳莹,李演,潘登,刘峰,丁学知,夏立秋,张友明,涂强.三种组成型启动子调控的鼠李糖脂基因在防御假单胞菌中的异源表达及活性研究[J].激光生物学报,2019,28(3). |
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| 作者姓名： | 谢芝玲 陈汉娜 钟林 徐佳莹 李演 潘登 刘峰 丁学知 夏立秋 张友明 涂强 |
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| 作者单位： | 淡水鱼类发育生物学国家重点实验室,湖南师范大学生命科学学院,微生物分子生物学湖南省重点实验室,湖南长沙410081;山东大学亥姆霍兹生物技术研究所,微生物技术国家重点实验室,山东大学生命科学学院,山东青岛266237;化学与分子工程学院,青岛科技大学,山东青岛266042;淡水鱼类发育生物学国家重点实验室,湖南师范大学生命科学学院,微生物分子生物学湖南省重点实验室,湖南长沙410081;山东大学亥姆霍兹生物技术研究所,微生物技术国家重点实验室,山东大学生命科学学院,山东青岛266237 |
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| 基金项目： | 湖南省发展生物工程;新产品合作创新中心项目;中国博士后科学基金;高等学校学科创新引智计划计划);济南市农业应用技术创新计划项目 |
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| 摘 要： | 本研究利用Red/ET DNA重组技术对实验室已有的含鼠李糖基转移酶基因RhlAB的分泌表达载体pBBR1-genta-RhlAB进行修饰,将3种不同强度组成型启动子(P_(apra)、P_(tac)和P_(rhaB))成功替换了RhlAB基因在铜绿假单胞菌中的原始启动子,成功获得了表达载体pBBR1-genta-P_(apra)-RhlAB,pBBR1-kan-P_(tac)-RhlAB和pBBR1-kanP_(rhaB)-RhlAB,并将这些表达载体分别在防御假单胞菌Pf-5中异源表达,通过LB培养基发酵42 h后,Pf-5/pBBR1-genta-RhlAB的鼠李糖脂产量为17. 56 mg/L,而Pf-5/pBBR1-genta-P_(apra)-RhlAB,Pf-5/pBBR1-kan-P_(tac)-RhlAB和Pf-5/pBBR1-kan-P_(rhaB)-RhlAB分别是11. 135 mg/L,441. 135 mg/L,557. 764 mg/L,启动子优化后产量分别是原始启动子的0. 63,25. 12和31. 76倍。对发酵产物进行高效液相色谱-质谱联用技术分析,共检出相对含量变化的4类质核比不同的鼠李糖脂同系物。并通过实时荧光定量PCR检测RhlAB基因的表达量,发现启动子替换为P_(tac)和P_(rhaB)后RhlAB基因表达量分别是原始启动子的2. 16和2. 77倍。本研究初步实现了RhlAB基因在Pf-5中的表达,发现组成型启动子P_(tac)和P_(rhaB)比RhlAB的原始启动子表达效率更高,可为异源合成鼠李糖脂提供重要参考。
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| 关 键 词： | RhlAB P.protegens Pf-5 Red/ET同源重组 鼠李糖脂 |
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