| 针对Fbxl5基因关键结构域F-box的Crispr/Cas9打靶有效性分析 |
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| 引用本文： | 高晶,邓云,陈宇,高建芳,傅雪珂,尹丽阳,万永奇,吴秀山,李永青.针对Fbxl5基因关键结构域F-box的Crispr/Cas9打靶有效性分析[J].激光生物学报,2016(6):559-563. |
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| 作者姓名： | 高晶 邓云 陈宇 高建芳 傅雪珂 尹丽阳 万永奇 吴秀山 李永青 |
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| 作者单位： | 湖南师范大学生命科学学院 蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室心脏发育中心,湖南长沙,410081 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目(81470377;81270156)，湖南省科教支撑计划项目(2014SK3099)，湖南省生物发育工程及新产品研发协同创新中心(2013-448-6) |
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| 摘 要： | 为了在动物体内研究Fbxl5基因是通过什么机制导致斑马鱼心脏出现突变表型,本文利用近几年兴起的CRISPR/Cas9打靶技术建立斑马鱼Fbxl5基因敲除品系。本文将打靶位点定位于Fbxl5的F-box结构域,也就是Fbxl5的第五号外显子上。首先经过基因打靶网站分析筛选出针对Fbxl5基因F-box结构域最适合的打靶位点,扩增出Fbxl5基因CRISPR/Cas9打靶双链DNA,并转录为RNA,与Hcas9共注射至斑马鱼胚胎。最后,在注射48 h后对Fbxl5基因CRISPR/Cas9打靶的有效性进行检测。首先在注射48 h之后收集胚胎提取基因组DNA,用特异性引物进行PCR扩增;将纯化后的Fbxl5基因PCR产物连接到p MD18-T载体,再经质粒提取,测序分析,通过与WT斑马鱼基因组序列进行比对发现Fbxl5-9号在PAM序列AGG下游缺失了4个碱基。证明该CRISPR/Cas9系统在敲除心脏发育候选基因Fbxl5是有效的,该研究为最终获得Fbxl5基因敲除斑马鱼奠定了良好的基础。
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| 关 键 词： | Fbxl5 F-box基因家族 CRISPR/Cas9 基因敲除 |
The Analysis of Effectiveness of Crispr/Cas9 Targeting the Key Domain F-box of Fbxl5 Gene |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Fbxl5 F-box gene family CRISPR/Cas9 gcne mutation |
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