利用CRISPR/Cas9技术建立斑马鱼Asb11基因敲除品系 |
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引用本文: | 尹丽阳,罗世锋,陈宇,漆轲婧,彭云,万永奇,吴秀山,李永青.利用CRISPR/Cas9技术建立斑马鱼Asb11基因敲除品系[J].激光生物学报,2018(3):252-259. |
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作者姓名: | 尹丽阳 罗世锋 陈宇 漆轲婧 彭云 万永奇 吴秀山 李永青 |
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作者单位: | 湖南师范大学省部共建淡水鱼类发育生物学国家重点实验室教育部重点实验室生命科学学院心脏发育研究中心 |
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基金项目: | 国家自然科学基金青年科学基金项目(81470377);湖南省生物发育工程及新产品研发协同创新中心(2013-448-6) |
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摘 要: | Asb11基因被报道与斑马鱼Notch信号的激活有关,本研究室过去的研究显示该基因在心肌和骨骼肌中特异性表达。因此推测Asb11基因可能是心脏发育相关候选基因。为了阐明Asb11基因在斑马鱼心脏发育过程中的作用,本文利用CRISPR/Cas9打靶技术构建敲除Asb11基因的斑马鱼品系。首先在线分析筛选出Asb11基因最适合的打靶位点,然后PCR扩增出Asb11基因gRNA的双链c DNA,再将Asb11基因的gRNA和Hcas9的mRNA共同注射到斑马鱼胚胎Ⅰ细胞期胚胎中。进行打靶的有效性检测,发现Asb11基因的一号外显子出现了碱基的缺失,表明CRISPR/Cas9系统对Asb11基因的敲除是有效的。对其F0代、F1代、F2代进行筛选,成功获得了Asb11基因敲除的斑马鱼品系,为探究Asb11在心脏发育中的作用奠定了基础。
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关 键 词: | 斑马鱼 Asb11基因 CRISPR/Cas9 |
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