| 利用RNA干涉技术及微束激光转化法培育抗病毒马铃薯 |
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| 引用本文： | 郭志鸿,张金文,陈正华,王兰岚.利用RNA干涉技术及微束激光转化法培育抗病毒马铃薯[J].激光生物学报,2006,15(5):525-531. |
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| 作者姓名： | 郭志鸿 张金文 陈正华 王兰岚 |
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| 作者单位： | 1. 甘肃农业大学农学院,甘肃,兰州,730070
2. 亚盛集团博士后科研工作站北京分站,北京,100101 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(30270843) |
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| 摘 要： | 针对马铃薯生产中危害严重、分布广泛并且具有强烈协生作用的马铃薯X病毒和马铃薯Y病毒,开展了抗病毒病的育种研究。采用RT-PCR技术分别克隆了267 bp的编码马铃薯X病毒外壳蛋白(PVX-cp)基因的相对保守区段X和294 bp的编码马铃薯Y病毒外壳蛋白(PVY-cp)基因的相对保守区段Y两个片段,将其按顺序连接,形成融合基因XY,然后分别将融合基因XY正向和反向插入到载体pHANN IBAL中,得到了载体pH IV,再用NoⅠt对pH IV进行酶切,将产生的大片段插入到载体pART27中,得到同时以PVX-cp基因和PVY-cp基因为靶标的XY的RNA i载体pAR IV。采用微束激光穿刺转化技术转化马铃薯品种Favorita的愈伤组织,得到了14株表型正常的转基因植株,转基因植株的southern b lot分析表明,导入的外源融合基因拷贝数介于2~4之间。攻毒实验表明,其中11株转基因植株对PVX、PVYo以及PVX和PVYo混合侵染均表现免疫,而其它3株的病毒浓度也低于对照。这一结果将为利用RNA i干涉技术开展植物抗多种病毒病的育种提供重要依据,验证了所构建的RNA干涉(RNA interference RNA i)载体具有良好的功能,同时又一次证明微束激光穿刺法是一种有效的遗传转化手段。
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| 关 键 词： | RNA干涉 马铃薯X病毒 马铃薯Y病毒 融合基因 微束激光穿刺技术 |
| 文章编号： | 1007-7146(2006)05-0525-07 |
| 收稿时间： | 2005/5/20 |
| 修稿时间： | 2005年5月20日 |
The Development of Virus Resistance Transgenic Potato Plants Using RNAi Technology and Laser Microbeam Puncture Technique |
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| GUO Zhi-hong,ZHANG Jin-wen,CHEN Zheng-hua,WANG Lan-lan.The Development of Virus Resistance Transgenic Potato Plants Using RNAi Technology and Laser Microbeam Puncture Technique[J].ACTA Laser Biology Sinica,2006,15(5):525-531. |
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| Authors: | GUO Zhi-hong ZHANG Jin-wen CHEN Zheng-hua WANG Lan-lan |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | RNAi PVX PVY fused gene laser microbeam puncture technique |
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