食管癌细胞NGAL基因－152 ～ －60区段存在TPA反应元件

以往研究发现，在TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白 (neutrophil gelatinase-associated lipocalin，NGAL) 基因过表达，但过表达机制不明. 最近研究提示，食管癌细胞NGAL启动子及其邻近区域可能存在着TPA反应元件. 为了对NGAL的这一TPA反应元件进行更准确定位，采用PCR法结合嵌套缺失实验从食管癌细胞中克隆了NGAL 5′ 侧翼区－152～+84、－140～+84、－78～+84、－59～+84、－50～+84、－41～+84、－37～+84、－29～+84和－10～+84等片段，并定向插入pGLB、pGLP或pGLE等萤火虫荧光素酶报告基因表达载体中，构建了pGLB-152、pGLP-152、pGLE-152、pGLB-140、pGLB-78、pGLB-59、pGLB-50、pGLB-41、pGLB-37、pGLB-29和pGLB-10等系列报告基因表达载体. 将上述报告基因表达载体分别同pRL-TK共转染食管癌细胞EC109，并用TPA刺激，检测TPA刺激转染EC109的相对荧光素酶活力，综合判定NGAL －152～+84区不同长度片段的TPA反应性，对NGAL启动子区的TPA反应元件给予进一步分段定位. 结果表明，NGAL启动子区的TPA反应元件位于－152～－60区段，而且应答TPA刺激的反应能力很强. 生物信息学分析结果显示，NGAL启动子区所存在的TPA反应元件很可能是一种新结构类型. 研究说明，NGAL在DNA序列上有应答TPA刺激的结构基础，将有助于深入到分子水平揭示TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中NGAL过表达机制，也有助于进一步认识TPA信号细胞内传递途径网络在肿瘤发生发展中的作用.