| 核因子-κB反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白报告系统的建立与应用 |
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| 引用本文： | 王付龙,梁华平,刘昕,徐祥,王正国.核因子-κB反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白报告系统的建立与应用[J].生物化学与生物物理进展,2003,30(1):78-83. |
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| 作者姓名： | 王付龙 梁华平 刘昕 徐祥 王正国 |
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| 作者单位： | 1. 第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所,重庆,400042;中国人民解放军第285医院,邯郸,056001
2. 第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所,重庆,400042 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展规划项目（973）（G1999054203）和国家自然基金资助项目（30080009）. |
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| 摘 要： | 建立核因子-κB(NF-κB)反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白(d2EGFP)报告系统，作为筛选NF-κB拮抗药物及研究其相关信号转导途径的工具.分别以EGFP与d2EGFP为报告基因、neor为筛选基因,构建成4×κB基序为增强子、SV40为基本启动子的报告基因载体p4κB-EGFP和p4κB-d2EGFP.两载体分别与p65载体瞬时共转染HEK293细胞,通过比较不同时相点EGFP和d2EGFP的调控表达，证明p4κB-d2EGFP是较理想的NF-κB反应性绿色荧光蛋白(GFP)报告基因载体.将p4κB-d2EGFP稳定转染HEK293细胞，从而获得NF-κB反应性报告细胞株HEK-d2EGFP.应用NF-κB“圈套”寡核苷酸(TFD)与p65载体瞬时共转染HEK-d2EGFP，1 mg/L NF-κB和2 mg/L NF-κB TFD组对p65蛋白诱导调控表达的d2EGFP具有明显拮抗作用.结果表明，NF-κB反应性d2EGFP报告系统可特异、灵敏、动态地反映和监测NF-κB的活性变化.
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| 关 键 词： | 基因表达调控 不稳定增强型绿色荧光蛋白 κB基序 核因子-κB 寡核苷酸 |
| 收稿时间： | 2002/6/24 0:00:00 |
| 修稿时间： | 8/2/2002 12:00:00 AM |
Application and Establishment of NF-κB-Responsive d2EGFP Reporter System |
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| WANG Fu-Long,LIANG Hua-Ping,LIU Xin,XU Xiang and WANG Zheng-Guo.Application and Establishment of NF-κB-Responsive d2EGFP Reporter System[J].Progress In Biochemistry and Biophysics,2003,30(1):78-83. |
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| Authors: | WANG Fu-Long LIANG Hua-Ping LIU Xin XU Xiang and WANG Zheng-Guo |
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| Institution: | Research Institute of Surgery,Daping Hospital, The Third Military Medical College, Chongqing 400042, China;The 285th Hospital ,The People's Liberation Army of China, Handan 056001,China;Research Institute of Surgery,Daping Hospital, The Third Military Medical College, Chongqing 400042, China;Research Institute of Surgery,Daping Hospital, The Third Military Medical College, Chongqing 400042, China;Research Institute of Surgery,Daping Hospital, The Third Military Medical College, Chongqing 400042, China;Research Institute of Surgery,Daping Hospital, The Third Military Medical College, Chongqing 400042, China |
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