| 高效絮凝素毕赤酵母表面展示系统的构建 |
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| 引用本文： | 韩双艳,韩振林,林影,郑穗平.高效絮凝素毕赤酵母表面展示系统的构建[J].生物化学与生物物理进展,2010,37(2):200-207. |
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| 作者姓名： | 韩双艳 韩振林 林影 郑穗平 |
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| 作者单位： | 华南理工大学生物科学与工程学院; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30670053)~~ |
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| 摘 要： | 为了获得高效的脂肪酶毕赤酵母表面展示系统,利用来自酿酒酵母絮凝素蛋白Flo1的N端874个氨基酸残基(FS)和C端的1101个氨基酸残基(FL)作为锚定蛋白分别构建了2套载体系统.带有前肽的米黑根毛霉脂肪酶(ProRML)克隆到构建的2套展示载体中,使米黑根毛霉脂肪酶(RML)分别以N端锚定或C端锚定的方式实现在毕赤酵母细胞表面的展示.利用RMLC端的Flag标签,通过流式细胞术和激光扫描共聚焦显微镜检测2套系统中RML在酵母表面的展示情况.研究发现,N端锚定于酵母表面的展示酶FSR以pNPC为底物时,水解活力达到了105.3U/g,大约为C端锚定的展示酶FLR活力的2倍.同时FSR比FLR具有更宽的温度、pH作用范围和更好的热稳定性.与游离酶和固定化酶相比,展示酶FSR也表现出更为优良的热稳定性.结果提示,基于Flo1N端锚定的展示系统更适合展示活性中心近C端的脂肪酶,推动了展示酶的进一步研究和开发.
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| 关 键 词： | 酵母表面展示 毕赤酵母 米黑根毛霉脂肪酶 N端锚定系统 C端锚定系统 |
| 收稿时间： | 2009/8/12 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2009/10/31 0:00:00 |
Construction of high efficiency Pichia pastoris surface display system based on Flo1 protein |
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| HAN Shuang-Yan,HAN Zhen-Lin,LIN Ying and ZHENG Sui-Ping.Construction of high efficiency Pichia pastoris surface display system based on Flo1 protein[J].Progress In Biochemistry and Biophysics,2010,37(2):200-207. |
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| Authors: | HAN Shuang-Yan HAN Zhen-Lin LIN Ying and ZHENG Sui-Ping |
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| Institution: | HAN Shuang-Yan,HAN Zhen-Lin,LIN Ying,ZHENG Sui-Ping(School of Bioscience , Bioengineering,South China University of Technology,Guangzhou 510006,China) |
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| Abstract: | To obtain a high efficiency Pichia pastoris cell surface display system,two new systems based on two different anchor proteins derived from Saccharomyces cerevisiae Flo1 protein(Flo1p) were constructed respectively.The N-terminal anchor system could make the foreign lipase displayed on the P.pastoris cell surface with its C terminus free by fusion with an anchor protein containing N-terminal flocculation functional domain of Flo1p(874 residues,FS),which was able to adhere to the cell surface via noncovalent... |
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| Keywords: | yeast cell-surface display Pichia pastoris Rhizomucor miehei lipase N-terminal anchor system C-terminal anchor system |
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