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pcsk9 siRNA对oxLDL诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡的影响
引用本文:刘录山,谢闵,姜志胜,杨琼,潘利红,武春艳,唐志晗,唐朝克,危当恒,王佐.pcsk9 siRNA对oxLDL诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡的影响[J].生物化学与生物物理进展,2009,36(3).
作者姓名:刘录山  谢闵  姜志胜  杨琼  潘利红  武春艳  唐志晗  唐朝克  危当恒  王佐
作者单位:南华大学心血管病研究所,动脉硬化学湖南省重点实验室,衡阳,421001
基金项目:国家自然科学基金,湖南省科技厅科技计划 
摘    要:为研究pcsk9基因沉默后对氧化型低密度脂蛋(oxLDL)诱导THP-1源性巨噬细胞凋亡的影响,用不同浓度oxLDL处理THP-1源性巨噬细胞48 h,Hoechst33258染色检测细胞凋亡,RT-PCR、Western blot分别检测pcsk9 mRNA、NARC-1蛋白的表达.应用Lipofectamine2000转染3对pcsk9 siRNAs进THP-1源性巨噬细胞中,筛选出最有效的siRNA再转染入THP-1源性巨噬细胞,24 h后加入oxLDL处理48 h,Hoechst33258染色观察细胞评价细胞凋亡,流式细胞术计数检测细胞凋亡率.结果发现,75 mg/L oxLDL处理THP-1源性巨噬细胞48 h后,Hoechst33258染色可见大量凋亡细胞.同时RT-PCR、Western blot检测发现,pcsk9 mRNA和NARC-1蛋白质表达量均随oxLDL浓度的增加而增加,75 mg/LoxLDL组增加最明显.不同浓度siRNA转染THP-1源性巨噬细胞后,RT-PCR筛选出3对siRNAs的终浓度为80 nmol/L均可出现明显的沉默效应.选取此浓度在蛋白质水平检测基因抑制情况,筛选出最有效的一对siRNA.将筛选出来的siRNA转染细胞24 h后,再用oxLDL处理48 h,Hoechst33258染色及流式细胞计数结果显示,转染siRNA组凋亡明显被抑制.结果表明,在本研究的浓度范围内,随着oxLDL浓度增加pcsk9的表达随之增加,同时,THP-1源性巨噬细胞凋亡也明显增加,75 mg/L oxLDL最明显,pcsk9 mRNA和蛋白质的表达也在该浓度最高.提示pcsk9 siRNA能有效抑制pcsk9基因的表达,从而有效抑制由oxLDL诱导的THP-1源性巨噬细胞的凋亡.

关 键 词:氧化型低密度脂蛋白  前蛋白转化酶枯草溶菌素9/神经细胞凋亡调节转化酶.1  巨噬细胞  凋亡  小分子干扰RNA

Effects of pcsk9 siRNA on THP-1 Derived Macrophages apoptosis Induced by oxLDL
LI Lu-Shan,XIE Min,JIANG Zhi-Sheng,YANG Qiong,PAN Li-Hong,WU Chun-Yan,TANG Zhi-Han,TANG Chao-Ke,WEI Dang-Heng,WANG Zuo.Effects of pcsk9 siRNA on THP-1 Derived Macrophages apoptosis Induced by oxLDL[J].Progress In Biochemistry and Biophysics,2009,36(3).
Authors:LI Lu-Shan  XIE Min  JIANG Zhi-Sheng  YANG Qiong  PAN Li-Hong  WU Chun-Yan  TANG Zhi-Han  TANG Chao-Ke  WEI Dang-Heng  WANG Zuo
Abstract:
Keywords:
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