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| 人食管癌cDNA酵母杂交文库的构建与鉴定及其应用 | |
| 引用本文： | 许丽艳,李恩民,牛永东,蔡唯佳,韩溟,吴炳礼,张灿,沈忠英,曾毅.人食管癌cDNA酵母杂交文库的构建与鉴定及其应用[J].生物化学与生物物理进展,2003,30(2):295-300. |
| 作者姓名： | 许丽艳 李恩民 牛永东 蔡唯佳 韩溟 吴炳礼 张灿 沈忠英 曾毅 |
| 作者单位： | 1. 汕头大学医学院肿瘤病理研究室,汕头,515031 2. 汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室,汕头,515031 3. 中国预防医学科学院病毒学研究所,北京,100052 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（39900069, 30170428）, 广东省自然科学基金资助项目（990799, 010431），广东省高校自然科学研究项目(200033)，广东省医学科研基金资助项目（A2001419），汕头大学研究与发展基金资助项目（L0004，L00012）. |
| 摘 要： | 以往在研究由促癌物12-o-十四烷酰佛波醇-13-乙酯（12-o-tetradecanoylphorbol-13 -acetate,TPA）诱导的人永生化食管上皮细胞恶性变中基因的差异表达情况时，曾获得中性粒细胞明胶酶相关lipocalin（neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL）等新的食管癌癌变相关基因.为深入研究这些癌变相关基因在食管癌中以蛋白质-蛋白质或蛋白质-DNA相互作用为基础的功能网络调控关系，建立了一个食管癌cDNA酵母杂交文库.采用Trizol试剂从一种新的人食管癌细胞（SHEEC，由人永生化食管上皮细胞转化而来）中提取细胞总RNA，采用Oligotex mRNA Kit从细胞总RNA中制备PolyA+ mRNA，采用SuperScriptTM Choice System For cDNA Synthesis Kit合成cDNA，以PolyA+ mRNA为探针，化学发光法监测cDNA合成的质量，以pGADT7为载体构建了SHEEC细胞的cDNA酵母杂交文库.文库的滴度为1.19×109 cfu/ml，重组片段大小主要集中在0.5～6.0 kb，重组率为50％.在此基础上，应用酵母单杂交技术手段对该文库中的NF-κB元件结合因子进行了筛选，在SD/-his/-leu/［＋15 mmol/L 3-AT］缺陷培养基平板上共获得了约360个单克隆.按照平板上酵母单克隆直径的大小，选择直径大于2 mm者91个，提取质粒进行酶切鉴定和一对一酵母单杂交验证实验，结果获得了30个阳性重组子，并随机取其中的9个阳性重组子进行测序和GenBank/BLAST同源分析，发现某些基因编码的蛋白质产物在关键氨基酸残基位点上与p65和p50的NF-κB元件结合域公共序列具有高度一致性.这些实验结果表明，所构建的人食管癌cDNA酵母杂交文库是成功的. |
| 关 键 词： | cDNA文库，酵母杂交，食管癌细胞系 |
| 收稿时间： | 2002/11/8 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2002年11月8日 |
Construction and Identification and Application of cDNA Library From an Esophageal Cancer Cell Line for Yeast-Hybrid System |
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| XU Li-Yan,LI En-Min,NIU Yong-Dong,CAI Wei-Ji,HAN Ming,WU Bing-Li,ZHANG Can,SHEN Zhong-Ying and ZENG Yi.Construction and Identification and Application of cDNA Library From an Esophageal Cancer Cell Line for Yeast-Hybrid System[J].Progress In Biochemistry and Biophysics,2003,30(2):295-300. | |
| Authors: | XU Li-Yan LI En-Min NIU Yong-Dong CAI Wei-Ji HAN Ming WU Bing-Li ZHANG Can SHEN Zhong-Ying and ZENG Yi |
| Institution: | Institute of Oncologic Pathology, Medical College of Shantou University, Shantou 515031, China;Department of Biochemistry and Molecular Biology, Medical College of Shantou University, Shantou 515031, China;Department of Biochemistry and Molecular Biology, Medical College of Shantou University, Shantou 515031, China;Institute of Oncologic Pathology, Medical College of Shantou University, Shantou 515031, China;Institute of Oncologic Pathology, Medical College of Shantou University, Shantou 515031, China;Department of Biochemistry and Molecular Biology, Medical College of Shantou University, Shantou 515031, China;Department of Biochemistry and Molecular Biology, Medical College of Shantou University, Shantou 515031, China;Institute of Oncologic Pathology, Medical College of Shantou University, Shantou 515031, China;Institute of Virlogy, Chinese Academy of Preventive Medicine, Beijing 100052, China |
| Abstract: | |
| Keywords: | cDNA library yeast-hybrid system esophageal carcinoma cell line |
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