| 一种新颖简便的荧光实时 RT-PCR相对定量方法的建立 |
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| 引用本文： | 张驰宇,徐顺高,黄新祥.一种新颖简便的荧光实时 RT-PCR相对定量方法的建立[J].生物化学与生物物理进展,2005,32(9):883-888. |
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| 作者姓名： | 张驰宇 徐顺高 黄新祥 |
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| 作者单位： | 江苏大学医学技术学院,镇江,212001 |
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| 基金项目： | 江苏省高校自然科学指导计划资助项目（04KJD180044）和江苏大学高级人才科研启动基金资助项目（2281270002）. |
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| 摘 要： | 为建立一种新颖、简便的荧光实时 RT-PCR 相对定量方法,根据实时定量标准曲线,推导出相对定量基因表达的公式 . 公式显示相对表达指数只与 CT 值和标准曲线的斜率相关 . 构建标准曲线的标准品需要通过克隆和体外转录获得,实验过程繁琐 . 当人为成比例增减标准品各个稀释度的具体拷贝数时,标准曲线的斜率并不改变,说明标准曲线斜率与标准品的具体拷贝数无关 . 因此,新的相对定量方法可以用任何一个待测样品的总 RNA ( 或 cDNA) ,经系列稀释后作为标准品,来构建相对定量标准曲线,获得斜率 . 与绝对定量法比较,新方法获得了基本相同的斜率和非常一致的定量结果 ( 差异小于4%) ,而传统的 2 -ΔΔCT法却表现出较大的定量误差 . 这些结果表明,新的相对定量方法是一种简便、准确和高效的定量基因表达的方法 .
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| 关 键 词： | 荧光实时定量 RT-PCR 相对定量 绝对定量 标准曲线 mRNA 定量 斜率 |
| 收稿时间： | 04 4 2005 12:00AM |
| 修稿时间： | 2005-04-042005-05-28 |
A Novel and Convenient Relative Quantitative Method of Fluorescence Real Time RT-PCR Assay Based on Slope of Standard Curve |
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| ZHANG Chi-Yu,XU Shun-Gao and HUANG Xin-Xiang.A Novel and Convenient Relative Quantitative Method of Fluorescence Real Time RT-PCR Assay Based on Slope of Standard Curve[J].Progress In Biochemistry and Biophysics,2005,32(9):883-888. |
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| Authors: | ZHANG Chi-Yu XU Shun-Gao and HUANG Xin-Xiang |
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| Institution: | Jiangsu University School of Medical Technology, Zhenjiang 212001, China;Jiangsu University School of Medical Technology, Zhenjiang 212001, China;Jiangsu University School of Medical Technology, Zhenjiang 212001, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | fluorescence real-time quantitative RT-PCR relative quantification absolute quantification standard curve mRNA quantification slope |
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