| 定量RT-PCR中人干细胞因子的RNA-CRS的构建 |
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| 引用本文： | 谭文斌,聂怡玲,罗赛群,郭小珊,成光杰,陈汉春,朱定尔.定量RT-PCR中人干细胞因子的RNA-CRS的构建[J].生物化学与生物物理进展,2000,27(3):315-318. |
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| 作者姓名： | 谭文斌 聂怡玲 罗赛群 郭小珊 成光杰 陈汉春 朱定尔 |
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| 作者单位： | 湖南医科大学分子生物学研究中心,长沙,410078 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（39700050）和China Medical Board（CMB No.99-698）资助项目. |
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| 摘 要： | 一种适用于定量RT-PCR、用ExonucleaseⅢ部分酶切剔除技术，构建人干细胞因子(hSCF)基因的RNA竞争性参考标准(RNA-CRS)的新方法：用RT-PCR技术，从HepG2细胞中扩增出全长人hSCF cDNA，并克隆入质粒pGEM-T获重组的pGEMSCF载体，经ExonucleaseⅢ和S1核酸酶适当处理，以导致hSCF cDNA中一小片段缺失，由此获得重组pGEMSCF模拟体(mimic)，经体外转录得到hSCF RNA-CRS.测序表明：该RNA-CRS与hSCF mRNA比较，缺失了从第499位至608位共110个核苷酸，但二者RT-PCR反应可用同一对扩增引物，反应动力学极为相似.这种hSCF RNA-CRS可作为一种较理想的竞争性参考标准，适用于定量RT-PCR中，以对重组hSCF在真核细胞中的表达水平进行准确的定量分析.此方法亦可推广应用于其他真核基因的表达水平及/或调控的检测和研究.
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| 关 键 词： | 基因表达定量，定量RT-PCR，人干细胞因子基因 |
| 收稿时间： | 6/7/1999 12:00:00 AM |
| 修稿时间： | : |
Construction of Human Stem Cell Factor's RNA-CRS in Quantitative RT-PCR |
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| TAN Wen-Bin,NIE Yi-Ling,LUO Sai-Qun,GUO Xiao-Shan,CHENG Guang-Jie,CHEN Han-Chun and ZHU Ding-Er.Construction of Human Stem Cell Factor's RNA-CRS in Quantitative RT-PCR[J].Progress In Biochemistry and Biophysics,2000,27(3):315-318. |
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| Authors: | TAN Wen-Bin NIE Yi-Ling LUO Sai-Qun GUO Xiao-Shan CHENG Guang-Jie CHEN Han-Chun and ZHU Ding-Er |
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| Institution: | Molecular Biology Research Center, Hunan Medical University, Changsha 410078, China;Molecular Biology Research Center, Hunan Medical University, Changsha 410078, China;Molecular Biology Research Center, Hunan Medical University, Changsha 410078, China;Molecular Biology Research Center, Hunan Medical University, Changsha 410078, China;Molecular Biology Research Center, Hunan Medical University, Changsha 410078, China;Molecular Biology Research Center, Hunan Medical University, Changsha 410078, China;Molecular Biology Research Center, Hunan Medical University, Changsha 410078, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | quantitation of gene expression quantitative RT-PCR human stem cell factor gene |
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