低氧环境中微囊化成骨细胞支持造血干/祖细胞扩增

在模拟骨髓造血壁龛(hematopoietic niche)的氧分压条件下，探讨微囊化成骨细胞(osteoblasts，OB)对脐血造血干/祖细胞(HSPC)体外扩增的支持和调控机理．分离培养人髂骨OB，采用聚电解质络合法将第3代的OB以密度为8×105 ml包埋在直径为0.5 mm的明胶-海藻酸钠-壳聚糖(GAC)微胶珠中．将微珠+造血干/祖细胞(A′组)、造血干/祖细胞(B′组)及微珠(C′组)置于6孔板，在5%氧分压下进行培养．同时在20%常氧条件下设置同样分组培养作为对照(A，B，C)．通过流式细胞分析和半固体细胞集落培养，观察比较各培养体系中造血干/祖细胞的扩增，并检测体系内白血病抑制因子(LIF)和白介素-6(IL-6)的含量变化以探讨作用机理．经过倒置相差显微镜观察，人成骨细胞在微珠中分散均匀，生长状态良好．微珠内部有丰富的孔道供营养物质传递，有大量造血干/祖细胞弱黏附于微珠表面．经过7天的培养，A′、B′、A、B四组造血细胞的扩增倍数分别为(49.0 ± 4.6)，(3.3 ± 0.5)，(17.7 ± 1.2)和(1.9 ± 0.2)．A′、B′、A 组的CD34+细胞分别扩增了(87.6 ± 8.3)， (2.2 ± 0.3)和(14.9 ± 1.0)倍，B组则出现下降．A′、B′、A、B四组CFU-Cs集落扩增倍数分别为(9.8 ± 0.8)，(3.5 ± 0.4)， (6.9 ± 0.7)和(2.6 ± 0.2)．低氧共培养体系比常氧共培养体系和非共培养体系对造血干/祖细胞的扩增有更大的促进作用．A′、B′、C′中IL-6和LIF含量明显高于对应的A、B、C组，与扩增倍数的差异相对应．微囊化成骨细胞对造血干/祖细胞扩增有明显的促进作用，5%氧分压接近体内造血壁龛氧环境，在此环境中成骨细胞分泌细胞因子量增多并通过其对造血干/祖细胞的扩增进行调节．

Microencapsulated Osteoblasts Support Hematopoietic Stem/Progenitor Cell Expansion in Hypoxic Environment