| 牛αS1-酪蛋白5′调控序列驱动人α-LA基因与LacZ基因在牛乳腺上皮细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 张 莉,李庆章,陈建晖,高学军,田雷.牛αS1-酪蛋白5′调控序列驱动人α-LA基因与LacZ基因在牛乳腺上皮细胞中的表达[J].生物化学与生物物理进展,2008,35(12):1371-1377. |
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| 作者姓名： | 张 莉 李庆章 陈建晖 高学军 田雷 |
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| 作者单位： | 东北农业大学乳品科学教育部重点实验室，哈尔滨 150030;东北农业大学乳品科学教育部重点实验室，哈尔滨 150030;东北农业大学乳品科学教育部重点实验室，哈尔滨 150030;东北农业大学乳品科学教育部重点实验室，哈尔滨 150030;东北农业大学乳品科学教育部重点实验室，哈尔滨 150030 |
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| 基金项目： | 黑龙江省科学技术计划资助项目(GC05B505). |
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| 摘 要： | 将牛αS1-酪蛋白5′调控序列约1.2 kb的片段，连接到含SV40启动子调控下β-半乳糖苷酶基因(LacZ)的PSV载体上，做为启动子，在其后连接0.76 kb的人α-乳白蛋白基因(α-LA)，构建真核表达载体 αS1-LA-psv．采用组织块接种法，培养奶牛乳腺上皮细胞，经传代纯化后，对细胞接种存活率、群体倍增时间、生长曲线、形态学等生物学性状进行检测，用免疫荧光细胞染色法对培养的奶牛乳腺上皮细胞进行角蛋白18鉴定，结果表明，成功建立奶牛乳腺上皮细胞系，细胞传至20代以上时仍保持旺盛的增殖活力．将构建的真核表达载体 αS1-LA-psv 转染奶牛乳腺上皮细胞，培养24～120 h均检测到了β-半乳糖苷酶的表达；培养72 h检测到细胞中人α-乳白蛋白的表达，表达量约为0.64 g/L．实验结果表明，建立的奶牛乳腺上皮细胞系具有外源基因表达活性，得到的牛αS1-酪蛋白5′调控序列能作为启动子指导外源基因的表达，构建的真核表达载体能在体外培养的牛乳腺上皮细胞中同时表达人α-乳白蛋白和β-半乳糖苷酶．
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| 关 键 词： | 人α-乳白蛋白基因，β-半乳糖苷酶基因，奶牛乳腺上皮细胞，基因表达 |
| 收稿时间： | 4/9/2008 12:00:00 AM |
| 修稿时间： | 2008/4/24 0:00:00 |
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