| 胎羊3β,20α-羟类甾醇氧化还原酶活性位点的组氨酸残基的鉴定 |
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| 引用本文： | 陈清轩,FREDERICK SWEET.胎羊3β,20α-羟类甾醇氧化还原酶活性位点的组氨酸残基的鉴定[J].生物化学与生物物理进展,1991,18(2):113-117. |
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| 作者姓名： | 陈清轩 FREDERICK SWEET |
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| 作者单位： | 中国科学院发育生物学研究所;Washington University School of Medicine.St. Louis, USA |
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| 摘 要： | 为进一步研究胎羊3β,20α-羟类甾醇氧化还原酶活性中心的特性,我们合成了放射性的16α-溴乙酸基孕酮和5α-二氢睾酮-17-溴乙酸酯作为亲和标记试剂。二者都是以不可逆的方式,活性位点定向地竞争性抑制酶的活性。当酶的浓度为1μmol/L,抑制剂的浓度为100μmol/L时,使酶失去一半活性所需时间(t0.5)分别为75 min(16α-BAP)和480 min(5α-DTB)。当在反应混合液中有底物孕酮或5α-二氮睾酮存在时,可降低抑制剂对酶活性的抑制速度。把标记的酶用盐酸水解,用氨基酸分析仪进行分析,最后确定,位于酶的活性中心的被标记氨基酸为组氨酸,它可能在氧化还原反应过程中发挥着重要作用。
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| 关 键 词： | 3β 20β-羟类甾醇氧化还原酶 亲和标记 16α-[2′-14C]溴乙酸孕酮 5α-二氢睾酮17-[2′-14C]溴乙酸酯 组氨酸 |
| 收稿时间： | 2/6/1990 12:00:00 AM |
| 修稿时间： | 1990/3/14 0:00:00 |
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