| 拟南芥LFR原核重组蛋白纯化和多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 高宁,王志娟,曾 博,崔素娟.拟南芥LFR原核重组蛋白纯化和多克隆抗体制备[J].生物化学与生物物理进展,2008,35(9):1059-1064. |
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| 作者姓名： | 高宁 王志娟 曾 博 崔素娟 |
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| 作者单位： | 河北师范大学生命科学学院分子细胞生物学实验室,石家庄,050016 |
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| 基金项目： | 国家重大科学研究计划项目，教育部跨世纪优秀人才培养计划 |
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| 摘 要： | 拟南芥中有一类含ARM结构域的蛋白质,研究表明它们中的一些在植物的生长发育和激素应答等方面发挥着重要的作用.在拟南芥突变体筛选中,获得了一个推测编码蛋白含ARM重复序列的新基因突变体lfr(leaf and flower related mumnt),它在叶子和花的发育过程中表现出较明显的表型.为进一步研究该基因编码蛋白的生物学功能及其分子作用机制,构建了pGEX-2TGST:LFR融合蛋白重组表达载体,将重组质粒转化到工程菌中诱导表达菌体蛋白,经SDS.聚内烯酰胺凝胶电泳检测,结果表明,融合重组蛋白成功获得了高效表达,分子质量在77 ku左右.重组蛋白经谷胱甘肽S.转移酶(GST)标签蛋白亲和层析法纯化,SDS-PAGE制备胶割胶富集,电洗脱法纯化后得到纯度较高的抗原.经对新西兰兔进行5次免疫,获得了多克隆抗血清.采用免疫吸附方法对抗血清进行了纯化,结果得到只识别LFR重组蛋白的抗血清.进一步提取拟南芥野生型及突变体的核蛋白,经蛋白质印迹检测,结果显示,在分子质量50ku左右处出现特异的蛋白质条带,证明所制备的抗血清可以与拟南芥LFR蛋白特异性结合.
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| 关 键 词： | 拟南芥 LFR重组蛋白 原核表达 多克隆抗体 |
| 收稿时间： | 2008/1/16 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2008/3/22 0:00:00 |
Purification of Arabidopsis LFR Recombinant Protein in Engineering Bacteria and Preparation of Its Antibody |
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| GAO Ning,WANG Zhi-Juan,ZENG Bo and CUI Su-Juan.Purification of Arabidopsis LFR Recombinant Protein in Engineering Bacteria and Preparation of Its Antibody[J].Progress In Biochemistry and Biophysics,2008,35(9):1059-1064. |
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| Authors: | GAO Ning WANG Zhi-Juan ZENG Bo and CUI Su-Juan |
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| Institution: | Institute of Molecular and Cell Biology, Hebei Normal University, Shijiazhuang 050016, China;Institute of Molecular and Cell Biology, Hebei Normal University, Shijiazhuang 050016, China;Institute of Molecular and Cell Biology, Hebei Normal University, Shijiazhuang 050016, China;Institute of Molecular and Cell Biology, Hebei Normal University, Shijiazhuang 050016, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Arabidopsis LFR recombinant protein prokaryotic expression polyclonal antibody |
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