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| 噬菌体展示重组人淋巴毒素突变体库及受体亲和筛选 | |
| 引用本文： | 沈毅珺,潘 卫,许 燕,王 征,杨 彤,谭靖伟,吴劲松,吴 芳,曹 峰,刘彦君.噬菌体展示重组人淋巴毒素突变体库及受体亲和筛选[J].生物化学与生物物理进展,2005,32(1):75-80. |
| 作者姓名： | 沈毅珺 潘 卫 许 燕 王 征 杨 彤 谭靖伟 吴劲松 吴 芳 曹 峰 刘彦君 |
| 作者单位： | 1. 第二军医大学基础医学部微生物学教研室,上海,200433;上海复旦张江生物医药股份有限公司,上海,201203 2. 第二军医大学基础医学部微生物学教研室,上海,200433 3. 上海复旦张江生物医药股份有限公司,上海,201203 |
| 基金项目： | 国家高技术“863”研究发展计划资助项目（2001AA215051，2002AA2Z3309）. |
| 摘 要： | 淋巴毒素 (lymphotoxin ， LT) 通过 TNFR1 受体传递凋亡信号，从而发挥抗肿瘤活性 . 对 LT 的受体结合区域进行多点随机突变，利用噬菌体展示重组人淋巴毒素 (rhLT) R46 ， S106 ， L130 三点随机突变组合文库和 S106 ～ F110 区域随机突变体库 . 噬菌体库与固相化 TNFR1 受体进行亲和筛选，富集了能与 TNFR1 受体结合的 rhLT 突变体 . 随机挑选 20 个单克隆噬菌体进行 ELISA 受体结合鉴定，其中 80 ％的克隆与 TNFR1 受体特异性结合，有 4 个克隆与 TNFR1 受体的结合能力高于野生型序列的 rhLT. 将这 4 个结合力高的突变体克隆于 pET32a(+) 载体，经过大肠杆菌表达和纯化操作后，检测这些突变体蛋白与 TNFR1 受体的结合活性和对 L929 细胞的杀伤活性，发现 3 个克隆的受体结合性质与其展示于噬菌体上时基本吻合，其中 C199 克隆与 TNFR1 的结合活性比野生型序列的 rhLT 提高了近 30 ％，且其对 L929 细胞的杀伤活性提高了近 90%. 应用噬菌体展示技术对淋巴毒素进行体外进化研究的尝试，为下一步的蛋白质结构和功能研究提供了思路，可成为大分子药物开发的有效工具 . |
| 关 键 词： | 淋巴毒素，随机突变，噬菌体展示，亲和筛选 |
Phage Display of Recombinant Human Lymphotoxin Mutation Libraries and Receptor Affinity Screening |
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| SHEN Yi-Jun,PAN Wei,XU Yan,WANG Zheng,YANG Tong,TAN Jing-Wei,WU Jin-Song,WU Fang,CAO Feng and LIU Yan-Jun.Phage Display of Recombinant Human Lymphotoxin Mutation Libraries and Receptor Affinity Screening[J].Progress In Biochemistry and Biophysics,2005,32(1):75-80. | |
| Authors: | SHEN Yi-Jun PAN Wei XU Yan WANG Zheng YANG Tong TAN Jing-Wei WU Jin-Song WU Fang CAO Feng and LIU Yan-Jun |
| Institution: | 1)Department of Microbiology, College of Basic Medical Sciences, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China;2) Shanghai Fudan-Zhangjiang Biopharmaceutical Co. Ltd,. Shanghai 201203, China;Department of Microbiology, College of Basic Medical Sciences, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China;Shanghai Fudan-Zhangjiang Biopharmaceutical Co. Ltd,. Shanghai 201203, China;Shanghai Fudan-Zhangjiang Biopharmaceutical Co. Ltd,. Shanghai 201203, China;Shanghai Fudan-Zhangjiang Biopharmaceutical Co. Ltd,. Shanghai 201203, China;Shanghai Fudan-Zhangjiang Biopharmaceutical Co. Ltd,. Shanghai 201203, China;Shanghai Fudan-Zhangjiang Biopharmaceutical Co. Ltd,. Shanghai 201203, China;Shanghai Fudan-Zhangjiang Biopharmaceutical Co. Ltd,. Shanghai 201203, China;Shanghai Fudan-Zhangjiang Biopharmaceutical Co. Ltd,. Shanghai 201203, China;Shanghai Fudan-Zhangjiang Biopharmaceutical Co. Ltd,. Shanghai 201203, China |
| Abstract: | |
| Keywords: | lymphotoxin random mutation phage display biopanning |
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