| 褐飞虱flightin的原核表达及其差异表达检测 |
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| 引用本文： | 张小琴,胡玉琼,张传溪.褐飞虱flightin的原核表达及其差异表达检测[J].昆虫知识,2013,50(4):1006-1012. |
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| 作者姓名： | 张小琴 胡玉琼 张传溪 |
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| 作者单位： | 浙江大学昆虫科学研究所 杭州310058 |
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| 摘 要： | flightin最早发现于果蝇Drosophila melanogaster的间接飞行肌中,并且定位于粗肌丝。这种蛋白对维持肌节的结构和功能起到了重要的作用,但其在具有长短翅型分化的褐飞虱Nilaparvata lugens Stl的不同翅型间差异并不清楚。本研究以长翅型雌虫褐飞虱cDNA为模板,通过PCR扩增得到褐飞虱flightin基因ORF全长,将其连接到表达载体pGEX-6P-1中以与谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合表达。将表达载体转入大肠杆菌表达株Rosseta,在不同温度、不同浓度IPTG的条件下诱导表达flightin,得到了最优表达条件,获得了高水平可溶性表达。在用GST抗体进行Western blotting验证GST-flightin融合重组蛋白表达的正确性后,我们通过GST柱纯化了的GST-flightin,进而用纯化后的蛋白免疫新西兰兔制备了高特异性的多克隆抗体。最后,我们用制备的多克隆抗体检测了长、短翅型雌成虫和不同发育阶段的褐飞虱体内flightin的表达差异。结果显示,flightin仅在长翅型成虫中表达,在短翅型雌成虫中未检测到其明显表达,而且flightin只在成虫期表达。本研究为进一步研究褐飞虱的flightin与其它蛋白互作、翅肌发育和翅型分化打下了基础。
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| 关 键 词： | 褐飞虱 flightin 原核表达 多克隆抗体 翅型差异 发育差异 |
Prokaryotic expression of the Nilaparvata lugens flightin gene and its differential expression in different life stages |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Nilaparvata lugens flightin prokaryotic expression polyclonal antibody wing dimorphism developmental expression |
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