不同温度胁迫下瓜实蝇RT-qPCR内参基因筛选 |
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引用本文: | 王凤英,杨朗,黎柳锋,廖世纯,廖仁昭,姜建军.不同温度胁迫下瓜实蝇RT-qPCR内参基因筛选[J].环境昆虫学报,2018(5). |
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作者姓名: | 王凤英 杨朗 黎柳锋 廖世纯 廖仁昭 姜建军 |
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作者单位: | 广西壮族自治区农业科学院植物保护研究所/广西作物病虫害生物学重点实验室 |
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摘 要: | 特定条件下稳定表达内参基因的筛选是利用实时荧光定量PCR研究基因表达的关键基础。本研究以不同温度胁迫后后的瓜实蝇Bactrocera cucurbitae 2龄幼虫、雌虫和雄虫为试验材料,对其9个候选内参基因表达进行了RT-qPCR分析,并利用ge Norm、Norm Finder、Best Keeper和Ref Finder 4款软件分析各候选内参基因在3种虫态中的表达稳定性。结果表明,18S rRNA基因Ct值(≤5)较小,不适合作为内参基因使用,其它8个内参基因在瓜实蝇2龄幼虫中的稳定性排序为Rp L32 RPS13 TBPβ-tubulin TUBE Actin2 G6PDH Actin3。雌虫表达稳定性由高到低为:RPS13 Rp L32β-tubulin TBP TUBE Actin2 Actin3 G6PDH。雄虫表达稳定性为Rp L32 RPS13β-tubulin TBP TUBE Actin2 G6PDH Actin3。ge Norm软件分析各个虫态内参基因最佳组合均为2个。RPS13和Rp L32组合可作为瓜实蝇不同虫态下温度胁迫后的内参基因。
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