| 濒危药用植物厚朴ISSR引物筛选及反应条件的优化 |
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| 引用本文： | 于华会,杨志玲,杨旭,谭梓峰,舒枭.濒危药用植物厚朴ISSR引物筛选及反应条件的优化[J].生态学杂志,2009,28(12):2444-2451. |
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| 作者姓名： | 于华会 杨志玲 杨旭 谭梓峰 舒枭 |
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| 作者单位： | 1. 中国林业科学研究院亚热带林业研究所,浙江富阳,311400
2. 云南农业大学,昆明,650201 |
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| 基金项目： | 国家科技部公益性林业专项资助项目(项目编号：200704022) |
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| 摘 要： | 以厚朴DNA为模板,利用正交试验分别对影响厚朴ISSR-PCR反应的Taq酶浓度、dNTP浓度、引物浓度、Mg~(2+)浓度、模板DNA浓度进行了优化,并通过梯度PCR确定不同引物的最佳退火温度和循环次数,最终确定厚朴最佳反应体系及扩增条件为:25μl 体系,其中包括1.5 mmol·L~(-1) MgCl_2,0.3 μmol·L~(-1)引物,0.04 U·μl~(-1)Taq 酶,0.2 mmol·L~(-1) dNTP,4 ng·μl~(-1)模板DNA,1 × Buffer;扩增程序:94℃预变性5 min,94℃变性30 s,50℃～60℃(退火温度随引物不同而定)退火45 s,72℃延伸90 s,共40个循环,然后72℃延伸8 min,4℃终止反应.此外,还利用优化的反应体系成功筛选出21条ISSR引物,并利用部分引物对厚朴个体进行了遗传多样性分析.
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| 关 键 词： | 厚朴 正交设计 引物筛选 ISSR |
Primer screening and optimization of ISSR reaction condition for endangered medicinal plant Magnolia officinalis. |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Magnolia officinalis orthogonal design primer screening ISSR |
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