| 筛选G-box结合蛋白的酵母单杂交文库的构建 |
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| 引用本文： | 杨鹏程,周波,李玉花.筛选G-box结合蛋白的酵母单杂交文库的构建[J].生物技术通讯,2012,23(4):532-536. |
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| 作者姓名： | 杨鹏程 周波 李玉花 |
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| 作者单位： | 东北林业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨,150040 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(30800082,30730078);高等学校博士学科点专项科研基金(200802251039);中国博士后科学基金(20090460868,201003409);东北林业大学青年拔尖人才支持计划(YTTP-1011-17) |
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| 摘 要： | 目的:筛选花青素合成中的关键基因查尔酮合成酶基因CHS启动子中G-box的结合蛋白,从而找到调节CHS表达的转录因子。方法:采用Matchmaker Gold Yeast One-Hybrid Library Screening System,将CHS启动子G-box序列串联后整合入酵母染色体,构建诱饵菌株;采用SMART技术合成芜菁幼苗下胚轴cDNA,将该cDNA与pGADT7-Rec表达载体共同转化诱饵菌株,通过同源重组在酵母细胞内同步进行cDNA文库的构建和筛选;用酵母菌落PCR法获得阳性克隆中的cDNA插入片段,测序后在NCBI网站进行Blast分析。结果:共筛选了2.52×106个酵母克隆,得到94个阳性克隆,菌落PCR获得了长度为0.4~2.0 kb的cDNA插入片段,并通过Blast推测了其编码蛋白。结论:实验结果证明酵母单杂交文库构建成功,初步筛选获得了G-box结合蛋白的候选蛋白,为研究CHS的表达调控奠定了基础。
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| 关 键 词： | 花青素 查尔酮合成酶 G-box 酵母单杂交 转录因子 |
Construction of Yeast One-Hybrid Library for Screening of G-box Binding Proteins |
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| YANG Peng-Cheng
,
ZHOU Bo
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LI Yu-Hua.Construction of Yeast One-Hybrid Library for Screening of G-box Binding Proteins[J].Letters in Biotechnology,2012,23(4):532-536. |
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| Authors: | YANG Peng-Cheng ZHOU Bo LI Yu-Hua |
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| Institution: | * College of Life Sciences,Northeast Forestry University,Harbin 150040,China |
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