| GST/MKRN1融合蛋白的表达、纯化及多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 白云秀,金蕊,陈皓,林坚,解跃华,黄君健.GST/MKRN1融合蛋白的表达、纯化及多克隆抗体制备[J].生物技术通讯,2006,17(1):31-33. |
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| 作者姓名： | 白云秀 金蕊 陈皓 林坚 解跃华 黄君健 |
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| 作者单位： | 军事医学科学院生物工程研究所,北京,100850 |
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| 摘 要： | 目的:利用大肠杆菌BL21(DE3)表达GST/MKRN1融合蛋白,亲和层析分离纯化目的蛋白,进行动物免疫制备多克隆抗体。方法:MKRN1cDNA全长1449bp,编码482个氨基酸残基。将其基因片段克隆到pGEX-4T-1载体上,获得pGEX-4T-1-MKRN1原核表达重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,在大肠杆菌表达系统中获得可溶性表达,经谷胱甘肽Sepharose4B介质填充的层析柱分离纯化蛋白,制备抗原免疫动物,得到pGEX-4T-1-MKRN1多克隆抗体。结果:ELISA结果显示血清抗体效价可达到1∶256000。通过Western免疫印迹及免疫细胞荧光分析,自制的多克隆抗体能特异地与MKRN1蛋白相互作用,可用于免疫细胞化学分析。结论:制备了效价和特异性良好的抗MKRN1多克隆抗体,经实验验证获得的免疫血清能够满足针对MKRN1的Western免疫印迹和细胞免疫组化检测的实验要求,为今后深入研究MKRN1表达的组织分布、细胞内定位及与端粒酶催化亚基(hTERT)之间相互作用的生物学意义提供了有用的实验工具。
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| 关 键 词： | MKRN1 端粒酶催化亚基 融合表达 多克隆抗体 |
| 文章编号： | 1009-0002（2006）01-0031-03 |
| 收稿时间： | 2005-06-30 |
| 修稿时间： | 2005年6月30日 |
Expression and Purification of GST/MKRN1 Fusion Protein and Preparation of Polyclonal Antibody Against GST/MKRN1 |
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| BAI Yun-xiu,JIN Rui,CHEN Hao,LIN Jian,XIE Yue-hua,HUANG Jun-jian.Expression and Purification of GST/MKRN1 Fusion Protein and Preparation of Polyclonal Antibody Against GST/MKRN1[J].Letters in Biotechnology,2006,17(1):31-33. |
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| Authors: | BAI Yun-xiu JIN Rui CHEN Hao LIN Jian XIE Yue-hua HUANG Jun-jian |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | GST/MKRN1 hTERT fusion expression polyclonal antibody |
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