| 摘 要： | 目的:研究尾型同源盒2(CDX2)在脐带间充质干细胞(UC-MSC)中过表达后粘蛋白2(MUC2)的表达情况,探寻利用基因修饰使UC-MSC大量表达MUC2的实验方法,了解诱导UC-MSC向内胚层分化对UC-MSC大量表达MUC2的必要性,为研究诱导UC-MSC向杯状细胞分化奠定基础。方法:实验分为5个组,分别为单转组(CDX2转染UC-MSC)、单诱组(仅诱导UC-MSC向内胚层细胞分化)、诱转组(诱导UC-MSC向内胚层细胞分化后,再将CDX2转染诱导后细胞)、空转组(不进行任何诱导但转染空质粒)和对照组(UC-MSC不做任何处理);为排除转染试剂本身的影响,单诱组在诱导分化后仍须转染试剂处理,但不加质粒;各组最后检测CDX2、MUC2的mRNA表达情况;内胚层细胞诱导利用重组人Activin A、重组人Wnt3a实现。结果:单转组、诱转组和空转组细胞在转染48 h后在荧光显微镜下能看到绿色荧光;单诱组和诱转组经诱导培养5 d后,内胚层标志物GATA4的表达增加27倍,Sox17的表达增加54倍。对5组细胞行RT-PCR检测MUC2与CDX2的mRNA表达情况,结果单转组CDX2升高113倍,MUC2升高30倍;诱转组CDX2升高196倍,MUC2升高98倍;空转组、单诱组中CDX2与MUC2的表达无明显变化。结论:在UC-MSC中过表达CDX2能够增加杯状细胞标志物MUC2的表达,而事先诱导UC-MSC向内胚层细胞分化,能进一步增加MUC2的表达。利用CDX2的过表达有使UC-MSC向杯状细胞分化的可能性,而Activin A、Wnt3a的诱导处理能促进其分化能力。
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